前往小程序,Get更优阅读体验!
立即前往
首页
学习
活动
专区
工具
TVP
发布
社区首页 >专栏 >使用MACS2进行差异peak分析

使用MACS2进行差异peak分析

作者头像
生信修炼手册
发布2020-05-07 16:27:55
5.8K0
发布2020-05-07 16:27:55
举报
文章被收录于专栏:生信修炼手册生信修炼手册

MACS2作为使用最广泛的peak calling软件,在v2版本中添加了差异peak分析的功能,所有的子命令功能描述如下

通过bdgdiff子命令来进行差异peak分析, 该命令不需要基于已有的peak calling结果,只需要输入每个样本对应的bedGraph格式的文件。需要注意的是,该命令只针对两个样本间的差异peak进行设计,适用于没有生物学重复的情况。

对于使用macs2来进行差异peak的完整流程,官方给出了详细的说明文档,链接如下

https://github.com/taoliu/MACS/wiki/Call-differential-binding-events

可以分为以下3步

1. 预测插入片段长度

通过predictd子命令可以预测样本的fragment size,命令如下

代码语言:javascript
复制
macs2 predictd -i input.bam
2. peak calling

在peak calling时,需要添加-B参数,这样才可以输出样本对应的bedgraph文件,同时需要保证peak calling时采用一致的--extsize的值,就是第一步预测出来的数值,取多个样本的均值即可。官方也给出了推荐值,对于大多数的转录因子chip_seq数据,推荐值为200, 对于大部分组蛋白修饰的chip_seq数据,推荐值为147,命令如下

代码语言:javascript
复制
# condition1
macs2 callpeak -B -t cond1_ChIP.bam -c cond1_Control.bam -n cond1 --nomodel --extsize 120
# condition2
macs2 callpeak -B -t cond1_ChIP.bam -c cond1_Control.bam -n cond1 --nomodel --extsize 120

在运行这一步的时候,会输出每个样本过滤之后的reads数目,示意如下

代码语言:javascript
复制
# tags after filtering in treatment: 19291269
# tags after filtering in control: 12914669

这个数值在差异分析中会用到,所以要记录下来。

3. 差异peak分析

命令如下

代码语言:javascript
复制
macs2 bdgdiff --t1 cond1_treat_pileup.bdg --c1 cond1_control_lambda.bdg --t2 cond2_treat_pileup.bdg \
--c2 cond2_control_lambda.bdg --d1 12914669 --d2 14444786 -g 60 -l 120 --o-prefix diff_c1_vs_c2

其中-d1-d2的值就是第二步运行时输出的reads数目,-o参数指定输出文件的前缀。运行成功后,会产生3个文件

  1. diff_c1_vs_c2_c3.0_cond1.bed
  2. diff_c1_vs_c2_c3.0_cond2.bed
  3. diff_c1_vs_c2_c3.0_common.bed

其中, con1.bed保存了在condition1中上调的peak, con2.bed保存了在condition2中上调的peak, common.bed文件中保存的是没有达到阈值的,非显著差异peak。

上述3个文件格式是完全相同的,最后一列的内容为log10 likehood ratio值,用来衡量两个条件之间的差异,默认阈值为3,大于阈值的peak为组间差异显著的peak, 这个阈值可以通过-c参数进行调整。

本文参与 腾讯云自媒体同步曝光计划,分享自微信公众号。
原始发表:2020-04-04,如有侵权请联系 cloudcommunity@tencent.com 删除

本文分享自 生信修炼手册 微信公众号,前往查看

如有侵权,请联系 cloudcommunity@tencent.com 删除。

本文参与 腾讯云自媒体同步曝光计划  ,欢迎热爱写作的你一起参与!

评论
登录后参与评论
0 条评论
热度
最新
推荐阅读
目录
  • 1. 预测插入片段长度
  • 2. peak calling
  • 3. 差异peak分析
领券
问题归档专栏文章快讯文章归档关键词归档开发者手册归档开发者手册 Section 归档