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表观转录组学-m6A简介

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生信修炼手册
发布2020-05-07 16:28:35
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发布2020-05-07 16:28:35
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DNA甲基化作为重要的表观遗传学标记,研究的非常广泛。与DNA相对应,在RNA水平也存在着多种化学修饰,已经发现的就有100种以上,在编码和非编码RNA上都存在。常见的几种mRNA上的化学修饰如下图所示

上图来自以下文献

Epitranscriptome sequencing technologies: decoding RNA modifications https://www.nature.com/articles/nmeth.4110

m6A是其中最常见,数量最多的一种转录后修饰,不仅在mRNA上存在,在tRNA, rRNA, lncRNA上也都存在,只不过研究最多的是mRNA上的m6A。m6A这个名字来源于发生甲基化修饰的位置

腺苷酸第6位的N上发生了甲基化修饰,即N6-methyladenosine, 简称m6A。随着m6A的大热,科学家们对其生物学过程和功能已经有了一个基本的认知和了解, 图示如下

上图来自以下文献

A Review in Research Progress Concerning m6A Methylation and Immunoregulation https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fimmu.2019.00922/full

作为一个可逆的生物学过程,相关的酶有以下3类

1. Writers

RNA甲基化转移酶,由多种蛋白亚基构成的复合物,识别靶标RNA,使其发生m6A修饰,已经明确的亚基包括METTL3, METTL14, WTAP等。

2. Erasers

去甲基化酶,识别已经发生了m6修饰的位点,将其还原为正常的腺苷酸,实现m6A的可逆, 已经识别的去甲基化酶包括FTO和ALKBH5。

3. Readers

与发生了m6A修饰的位点相结合,构成复合体,介导其实现功能,最经典的Readers蛋白为YTH蛋白家族,包括YTHDF1, YTHDF2等等。不同的Reads介导m6A位点发挥不同的下游功能, 包括RNA的转运,mRNA稳定性,可变剪切等多种过程。

研究转录组m6A修饰有多种技术,示意如下

图a表示m6A-seq, 和chip_seq类似的技术,用抗体富集发生了m6A修饰的fragment, 然后和input样本相比较,通过peak calling识别发生了m6A修饰的区域, 该技术通量高,但是分辨率不够,只能够定位到m6A修饰位点附近200nt左右的区域,无法达到单碱基的分辨率;图b表示PA-m6A-seq, 加入4SU加强交联,同时将T碱基变成U碱基,用365nm紫外线进行交联,解交联之后,酶切成20-30nt的片段,通过序列比对可以识别m6A位点附近30nt左右的区域,提高了分辨率,进一步查看30nt窗口内的碱基序列,可以精确定位发生m6A修饰的位点, 该技术只能检测与4SU操作位点附近的m6A, 距离远的位点无法检测到;图c表示miCLIP, 是PA-m6A-seq的加强版, 客服了距离限制, 在保证单碱基分辨率的基础上可以识别到更多的m6A位点;图d表示m6A-LAIC-seq, 加入内参ERCC,可以对基因的m6A修饰水平进行定量。

目前, m6A-seq仍然是最常见的研究m6A修饰的技术,分析内容包括数据质控,比对基因组,peak calling, peak基因注释,差异peak分析,motif预测等等,大部分分析内容和chip_seq, atac_seq是重叠的,只不过针对RNA序列,会有一些特有的软件,后续文章中会详细介绍。

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原始发表:2020-04-20,如有侵权请联系 cloudcommunity@tencent.com 删除

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