如何采用Image Pro Plus测量病变区域的总面积？

前言

常规的组织切片病理变化评价，多采用4级法（即轻微、轻度、中度、中度）。这是一种经典的组织病变评价方法，也是当前的主流。

但随着全切片扫描和量化分析观念的普及，定量分析组织病变逐渐流行。

有时，定量分析后获取数据，能够较准确地反映病变的实际程度和病变范围。当然了，获取的这些数据也更方便对组间差异进行统计学分析。进行统计分析的一个较大前提是在可能的范围内扩大实验样本量，这样分析出来的数据才可能通过统计学的检验，并且真实地反映病变程度。如果样本量太小，获得的定量数据可能会影响判断。

不论如何，转变观念，尝试定量分析，讨论和确定哪些类型的指标可以定量分析，可能是病理领域需要关注的地方。

闲话不多说，今天再来说说如何使用Image Pro Plus测量图片中不同目标区域的总面积。

步骤

1. 确定是否使用面积作为定量分析指标

面积测量是定量分析时的一个重要指标。

虽然切片上的病变看起来是二维的，但实际上病变可能是一个不规则立体的状态。因此，某些时候，切片上的面积所代表的实际意义可能比单纯意义上的长、宽、高、厚等更加具有测量价值。

一旦我们选择了使用面积来定量分析组织病变的程度，接下来就是分析确定IPP的测量模式。

2. 确定IPP的分析模式

IPP测量不规则区域的总面积常分为2种方法，即色彩自动选择模式和手动勾勒模式。色彩自动选择模式即是在吸管模式或HSI模式下，自动选定和计算图中所有的你确认的颜色所存在的区域，测量时不会受到组织分布复杂性的影响。手动勾勒即是通过手动的方法勾勒出目标区域，测量时不易受到病变在图中对比度弱的影响。这两种方法有各自适用的情况，不存在哪个方法更好。

组织病变的分布特征和切片染色方法都能决定IPP的测量方法差异。

为什么这样说呢？举个例子，可以看看下面两张图，分别为Masson染色和HE染色。Masson染色的目的是为了测算胶原组织面积，HE染色是为了测量肉芽组织面积。

对于Masson染色的图片而言，红蓝对比度极高，只需要准确识别蓝色区域的颜色，即可得到胶原的面积，并不用通过勾勒其轮廓。必须选择色彩自动选择模式。(关于这种模式的测量方法，往期内容已讲过 → Image Pro Plus分析面积、面积比。)

另一方面，HE染色图片的肉芽组织颜色无法与周围组织完全区分开，此时显然无法通过色彩自动选择模式来测量肉芽组织面积（吃力不讨好），应该采用手动勾勒模式。

3. IPP测量多个不连续目标区域总面积的图文步骤

示意图片需要测量肉芽组织的总面积（如下）。可见图中的肉芽组织分布并不连续，这种情况下需要通过3次手动勾勒才能将所有肉芽组织标记出来。

（1）常规打开IPP，点击open打开需要分析的图片，点击非规则区圈选按钮（即Irregular AOI）

（2）按住鼠标左键，完全勾勒出第一个目标区域的轮廓后，按鼠标右键结束

（3）接下来，先点击Multiple AOI，点击Add，再点击NEW AOI

（4）常按照步骤（1）的方法继续勾勒出第二个目标区域

（5）按照步骤（3），添加非规则区按钮，继续按照步骤（1）的方法勾勒第三个目标区域

（6）点击count and measure objects

（7）点击Edit中的Cover AOI To Objects，将图中勾勒的区域全部覆盖为红色

（8）若图中勾勒的区域未能全部覆盖为红色，存在孔洞。此时可点击count and measure objects中的Option选项，在弹出框中如下勾选

（9）点击count and measure objects中的View，点击Statistics查看Sum值，即所勾勒的3个目标区域总面积。单位为平方像素，若转化为实际尺寸需根据图中比例尺来确定。

结束

总结：使用IPP作任何测量之前，一定要思考这个预测量指标所代表的实际意义。IPP是软件，它只会根据人的操作输出结果，但解读这些结果所包含的实际意义则是更加重要的。