你所不知道的 qPCR应用

荧光定量PCR技术于1996年由美国Applied Biosystems公司推出，由于该技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到广泛应用。荧光定量PCR技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时监控反应过程。随着PCR 反应的进行，反应产物不断累积，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环，收集一次荧光强度信号，这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化，结合相应的软件对产物进行分析，可以得到荧光扩增曲线，计算待测样品初始模版的量。实时荧光定量PCR技术是一次由定性技术向定量技术的飞跃，运用该项技术，可以对DNA、RNA样品进行相对定量、绝对定量和定性分析。

最近的新冠状病毒爆发，qPCR检测技术因其快速、灵敏度高、灵活方便等特点，在病毒检测过程中发挥了巨大的贡献。目前获批的COVID-19病毒检测试剂盒，有近半数的是qPCR检测类产品。

引物F: 5’-CAATGGTTTAACAGGCACAGG-3’ R: 5’-CTCAAGTGTCTGTGGATCACG-3’可以将2019-nCoV与所有其他人类冠状病毒（包括蝙蝠SARSr-CoV WIV1）区分开。

Zhou P, Yang X L, Wang X G, et al. A pneumonia outbreak associated with a new coronavirus of probable bat origin[J]. Nature, 2020: 1-4.

本人总结了qPCR技术的一些应用如下：

1. HIV/HBV/HPV/COVID-19 病毒筛查检测

2. EGFR/ALK/ROS1/KRAS/ERBB2/MET/RET/NRAS/BRAF/PIK3CA等肿瘤靶向用药热点突变（SNV、CNV、SV）检测

3. SMA携带者（SMN1 exon7 del）筛查

4. 地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测，耳聋基因筛查

5. mRNA基因表达分析

6. miRNA与Non-coding RNA分析

7. 药物代谢酶基因分型，用于药物敏感性检测和剂量指导

8. 娱乐性基因检测（酒精代谢等）

9. 食品安全:食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。

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