本protocol仅供参考,还请根据自己的组织和实际的实验设计进行相应的替换
结肠是大肠的一部分,主要功能是吸收水分和电解质,将食物残渣形成粪便。结肠组织学结构包括黏膜、黏膜下层,肌层和外膜。黏膜表面光滑无绒毛,上皮为单层柱状,由吸收细胞和杯状细胞组成;黏膜下层则是结缔组织,含成群脂肪细胞;肌层由内环形和外纵行两层平滑肌组成,可形成结肠袋;外膜为浆膜或者是纤维膜。
在本实验中使用到的TrypLE™ Express 是一种非动物源性重组酶,用于各种粘附状态下的哺乳动物细胞,包括 CHO、HEK293、A529、角质形成细胞和胚胎干细胞。TrypLE™ Express 裂解赖氨酸和精氨酸 C-末端上的肽键,可直接替代胰蛋白酶,特异性高,细胞损害小。
结肠组织图片及示意图
转移培养基(500 mL)
HPGA (500 mL)
洗涤培养基(50 mL)
螯合培养基(50 mL)
注意:结肠组织脂肪含量高,要多清洗,清洗不完全会干扰细胞计数,严重会影响细胞捕获。解离过程中容易结团,一定要充分消化。另外,结肠组织代谢比较旺盛,解离的时间和酶的强度把握不好的话,活率容易偏低,即使合格了最后下机数据可能线粒体偏高。