人—卵巢组织细胞悬液制备流程

注 | 以下操作指南中涉及的消化酶以及实验方法仅供参考，实际应用过程中请根据自己的组织样本类型进行细节上的调整。

背景介绍

卵巢表面被覆单层扁平或立方上皮，在卵巢门处与腹膜脏层的间皮相延续。上皮下方为薄层致密结缔组织，称白膜。卵巢实质的周围部称皮质，较厚，主要特点是含大量卵泡；中央部称髓质，主要由疏松结缔组织构成，含较多弹性纤维和血管。

卵巢组织示意图

实验仪器及耗材

实验步骤

1. 用PBS清洗组织后放置在培养皿中，用手术刀将组织粗略的切碎。
2. 这一步对于提高消化效率至关重要！
3. 切碎的组织转移到含有胶原酶解离液的50 mL离心管中（10 mL/组织，但这取决于组织的大小）。
4. 拧紧盖子，用封口膜密封。
5. 37 °C 孵育45分钟。每10分钟摇晃一次。
6. 用100 μm细胞过滤器过滤。450g离心5分钟。
7. 小心去除上清液，留下的液体在0.5 mL和1mL之间。
8. 细胞沉淀用5 mL PBS重悬。
9. 用台盼蓝染色后进行细胞计数器检查细胞活力，满足需求则继续下一步。
10. 450g离心5分钟，弃上清。5 mLPBS重悬。
11. 重复步骤9，使用台盼蓝血细胞计数仪分析细胞数量和活性。
12. 检测细胞活性，活性在85%以上可用于后续测序实验。

制备结果

注意：尽量选取新鲜的组织样品进行操作，组织离体时间多长细胞容易死亡。影响最终的实验效果。