(1)构建DNA文库
超声波将DNA分子打断成300-800bp长序列片段,再在两端加上互补配对的adapter,再通过PCR扩增达到一定浓度,构成单链DNA文库。
(2)桥式PCR
桥式PCR完成后,形成了很多的桥形的互补双链,强碱解链,利用一种酶--甲酰胺基嘧啶糖苷酶(Fpg)选择性的切掉lane上p5‘ 连接的链,只留下了与lane p7连接的链即Forward Strand. ------https://www.jianshu.com/p/101c14c3a1d2
(3)测序
illumina采取了“一次加一个荧光碱基,用完失效”的办法。
(4)Index测序
上面的循环结束后,read product被冲掉,index1 primer和链上的index1 互补配对,进行index1的检测。测完后,洗脱产物,得到index1 的序列。接下来p5与lane上的p5‘配对,测得了index2,并洗脱
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