Day7——查布铎徳勒

测序的过程和原理

一代测序技术 Sanger测序法

主要通过合成dna时，通过添加ddNTP阻断dna的合成，利用放射性ddNTP通过凝胶电泳分离和放射自显影来读取序列。

特点：读长长（1000bp），准确性高（99.999%），通量低

二代测序技术 NGS

边合成边测序。利用荧光标记dNTP在合成时不同的荧光通过捕捉荧光信息经过特定计算机软件处理获得待测序列。

流程：

DNA文库构建
簇的生成——桥式PCR
测序
数据产出

特点：通量高、时间短、读长短

三代测序技术 单分子实时DNA测序

DNA测序时，不需要经过PCR扩增，实现了对每一条DNA分子的单独测序。

SMRT技术

用四色荧光标记dNTP,通过合成DNA时捕获的光的波长与峰值判断碱基类型，通过检测相邻两个碱基之间的测序时间、两峰之间的距离来检测甲基化等碱基修饰情况。

特点： 无需PCR扩增，读长长，无视GC含量的影响

纳米孔单分子测序技术

当在膜两侧施加电压，分子马达驱动DNA分子通过纳米孔，导致电荷发生变化，每种碱基引起的电流变化是不同的，通过检测这些电流进而转化为对应的碱基序列。、

NGS组学分类

1.基因组学（核酸序列分析）

全基因组测序（WGS)
全外显子组测序（WES）
简化基因组测序（RRGS）

作用：1）基因组作图（遗传图谱、物理图谱、转录本图谱）（2）核苷酸序列分析（3）基因定位（4）基因功能分析

2.转录组学（基因表达分析）

mRNA-Seq
IncRNA-Seq（长链非编码RNA）
sRNA-Seq（主要是miRNA-Seq

作用：（1）获得物种或者组织的转录本信息（2）得到转录本上基因的相关信息，如基因结构功能等（3）发现新的基因（4）基因结构优化（5）发现可变剪切（6）发现基因融合（7）基因表达差异分析

3.蛋白质组学

蛋白质组数据处理、蛋白及其修饰鉴定   
构建蛋白质数据库、相关软件的开发和应用   
蛋白质结构功能预测   
蛋白质连锁图

4.代谢组学

代谢物指纹分析
代谢轮廓分析