DAY7-测序知识

测序世界文章收获

作者：刘小泽 链接：https://www.jianshu.com/p/101c14c3a1d2

来源：简书

著作权归作者所有。商业转载请联系作者获得授权，非商业转载请注明出处。

测序原理

DNA测序原理和思路

1954年，Whitfeld等就提出了测定多聚核糖核苷酸链的降解法，该方法利用磷酸单酯酶的脱磷酸作用和高碘酸盐的氧化作用从链末端逐一分离寡核糖核苷酸并测定其种类。目的就是想通过这种一个一个“数”的方法来得到DNA的碱基顺序。

一代测序（Sanger测序）

第一代测序技术的主要特点测序读长可达1000bp，准确性高达99.999%，二三代所不能及），而是因为它的通量低，成本高。

目前构建质粒进行测序验证，以及构建单克隆敲除细胞进行验证时，使用的就是一代测序。

二代NGS测序

优点：通量大，不像一代测序成本高，高准确性

缺点：测序速度大幅提高，成本降低，读长短，拼接困难，存在一定的错误率

步骤：

（1）构建DNA文库

（2）上样品

（3）桥式PCR

（4）测序

三代测序

纳米孔单分子测序技术为标志，不需要经过PCR扩增，超长读长，可达二代测序的100倍以上，实现了对每一条DNA分子的单独测序。错误率比二代要高，达到10-15%。