PCR产物测序结果分析

一.PCR的模板和引物（PCR的试剂和仪器在文末）：

质粒名称pFastBac （RFP），浓度600 ng/ul （共10 ul；PCR模板5-10 ng）；

引物对dsRFP-F2和dsRFP-R1 (干粉，按管子上说明配制)。

PCR产物预期大小：414 bp。

质粒名称pCMV-EGFP，浓度625 ng/ul（共8 ul；PCR模板5-10 ng），

引物对EGFP-F和EGFP-R (干粉，按管子上说明配制)。

PCR产物预期大小：279 bp。

二.PCR产物电泳结果:

泳道1和5是：Marker，

泳道2和6是：pFastBac （RFP）做模板的PCR产物,

泳道3和7是：pCMV-EGFP做模板的PCR产物,

泳道4和8是：空白对照。

三.PCR产物测序分析（BIOEDIT软件）：

图1.测序结果的反馈（两个样品测序都是成功的，有一个有套峰，跟技术沟通后表示影响不大）

图2 .pFastBac （RFP）做模板的PCR产物测序结果（峰形比较完整，基本为单一峰形）

图3.pCMV-EGFP做模板的PCR产物（峰形比较完整，基本为单一峰形）

四.NCBI中进行Blast分析：

1.pFastBac 的PCR产物测序结果（390bp）：

GCGGACGCGGCTCAGTGCGCATGGAGGGCACCGTGAACGGCCACGAGTTCGAGATCGAGGGCGAGGGCGAGGGCCGCCCCTACGAGGGCCACAACACCGTGAAGCTGAAGGTGACCAAGGGCGGCCCCCTGCCCTTCGCCTGGGACATCCTGTCCCCCCAGTTCCAGTACGGCTCCAAGGTGTACGTGAAGCACCCCGCCGACATCCCCGACTACAAGAAGCTGTCCTTCCCCGAGGGCTTCAAGTGGGAGCGCGTGATGAACTTCGAGGACGGCGGCGTGGTGACCGTGACCCAGGACTCCTCCCTGCAGGACGGCTGCTTCATCTACAAGGTGAAGTTCATCGGCGTGAACTTCCCCTCCGACGGCCCCGTAATGCAGAAAGAAGACCAA

2.经过Blast比对：

3.pCMV-EGFP测序结果（190bp）：

CTGCATCGAGTGAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCCCTCCAACATCGAGG

4.经过Blast比对：

到此为止，整个PCR实验算是告一段落。

电泳和测序结果都证明，

PCR获得了目的产物。

这里要说一下，为什么要用质粒作为模板？

很简单。

一.质粒做模板做实验成功率高。对于一个中学而言，自己制备一个成功的模板是一项大工程；

二.质粒的序列和引物比较明确。方便后续的分析。

我把PCR的详细的试剂和仪器亲清单都列了出来,有任何技术问题,欢迎评论区回复咨询.