关于ELISA实验，你想要了解的都在这里~

你也在做ELISA嘛？

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    酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，简称 ELISA，是用于检测微量物质的固相免疫测定方法，是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。自1971年问世以来，发展十分迅速，已成为是免疫学和分子生物学中广泛使用的实验室技术。

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检测原理

    将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，用酶标记抗原或抗体孵育，使抗原抗体在固相表面结合，通过加底物发光显色检测液体中未知抗体或抗原的方法。

RayBiotech ELISA试剂盒检测原理示意图

特点：

高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性

高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，pg水平微量检测

定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值

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ELISA类型

    在具体的实验中，由于的不同反应物具有不同的特性，具体的检测方法也有很多种。例如：直接法、间接法、夹心法、竞争法、捕获法等。

直接法：

     将抗原固定在载体上，然后加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，该方法操作简便，无需二抗可避免交叉反应，缺点是费用较高，并且无法检测抗体数量。

间接法：

    将抗原固定与载体上，采用抗原连接被检测抗体，再连接酶标抗体的方式进行检测，虽然可以做不同的检测分析，但该方法只能抗体的测定，并且容易发生交叉反应。

双抗体夹心法：

    该方法中抗原被捕捉抗体和酶标抗体结合与不同位点，捕捉抗体固定于载体上，酶标抗体通过结合抗原进行测定，该方法中使用的抗体需为单抗，并且与抗原有不同的结合位点，如此才可避免交叉反应和竞争性反应。因此夹心发具有高灵敏度，高专一性的特点，但只适合有多个结合位点的抗原。

双抗原夹心法：

    该方法中将抗原固定于载体，检测样本中的抗体与抗原结合后，需要使用酶标抗原进行后续的结合，可以用来检测样本中的抗体。双抗原夹心法的关键在于酶标抗原的制备。

03

ELISA检测的实验步骤

其实，不管是哪一种ELISA,它的操作都由以下几种基本的操作组合而成:

首先，将抗原或抗体吸附到固相载体上;加入待检样品以及后续试剂;温育;洗涤去掉游离未结合的反应物;加入酶检测底物以及最后的结果的判读。

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