逆转录酶试剂的比较

野生型MMLV逆转录酶虽具有诸多不足，但其RNase H活性弱、cDNA合成长度和效率都比AMV逆转录酶更好，在基因工程的改造方面也比AMV逆转录酶更加容易。因此，如何提高野生型MMLV逆转录酶的热稳定性、增强对抗二级结构和高GC的能力、改善其与RNA模板亲和力等方面成为各生物试剂研发厂家竞相研究的热点。

目前，在耐高温逆转录酶研究上已取得了一些不错的成果，如美国Promega公司的AWV Reverse Transcriptase XL，可在60℃-70℃条件下工作，可用于从RNA样品中合成长达12kb的cDNA。日本Takara的PrimeScript RT Reagent Kit试剂盒可在42℃-50℃下工作。国内Starvio公司开发的超级逆转录酶，利用了基因工程技术，成功将Starvio超级逆转录酶的热稳定性大幅提高，即使在摄氏55度时也有较好的逆转录表现。此外，Starvio超级逆转录酶还可有效克服RNA模板二级结构的影响，对于具有二级结构的RNA模板也能获得理想的实验结果。

除了提高逆转录酶耐高温的能力，改善逆转录酶与RNA模板的亲和力也非常重要。国外知名生物公司Qiagen所研发的Omniscript Reverse Transcription (RT) Kit专为单次逆转录反应中使用50 ng至2 μg RNA模板而设计，与RNA的高亲和力使得Omniscript Reverse Transcriptase即使是低拷贝模板，在RT-PCR中也能实现较高的灵敏度。经过基因工程改造，国内Starvio超级逆转录酶也具有较强的模板RNA亲和力，可检测10 pg至5 μg总RNA中的目标片段或10 pg至500 ng的mRNA，对于总RNA量较少的样本和目标RNA拷贝数较低的样本，也能获得高效率的逆转录（如图1）。

总的来说，市面上各种逆转录酶产品都在不断改进和优化中，选择合适的逆转录酶对实验可以起到积极的促进作用。如果不需要担心经费和成本问题，可以选择诸如Q等知名品牌；如果经费不是特别富余，综合考虑逆转录酶的耐高温能力、与RNA模板亲和力、总RNA量较少或是目标RNA拷贝数较低情况，可以选择Starvio超级逆转录酶。