动物行为实验指南丨啮齿动物攻击性相关行为测试

所有研究使用10周龄的CFW小鼠（Charles River Laboratories），雌性小鼠在整个研究期间与去势的雄性小鼠配对饲养，而雄性小鼠在隔离饲养前与刺激雌性小鼠配对饲养48小时。实验雄性小鼠与群养笼伴分离，与雌性小鼠配对2天，然后单独饲养额外10天，以获得大致相等的好斗者（AGG）和非好斗者（NON）的数量，而不影响AGGs表现出的攻击性。雌性小鼠至少在前14天与手术去势的CFW雄性小鼠饲养。12周龄的C57BL/6J小鼠被用作所有社交互动的外来者。

攻击者筛选和居住者入侵（RI）测试：

移除笼顶并替换为有机玻璃盖以监测试验。在与配对雌性小鼠进行试验之前，将共同生活的雄性小鼠移至保存笼直到测试完成。将与居民性别相匹配的新型C57BL/6J小鼠引入每个笼子，允许小鼠自由互动5分钟。5分钟后，将外来者小鼠返回到它们的家笼中，如果是雌性居民-外来者试验，共同生活的雄性小鼠返回到它们的家笼中。所有视频都被记录下来以便后续分析。

Fig1 居住者入侵测试

B 雄性和雌性好斗者（AGGs）的总攻击持续时间（B）和潜伏期（C）没有显著差异。D 总探究次数。所有组的社交探究水平相似。E 探究潜伏期。与雄性好斗者相比，雄性非好斗者（NONs）探究外来者的潜伏期显著更短

攻击性条件位置偏好（CPP）：

攻击性条件位置偏好是一种行为学实验方法，用于评估动物对与攻击性行为相关联的环境条件的反应。在这种实验设计中，动物（通常是小鼠或大鼠）被置于一个可以自由穿梭于两个或多个区域的环境箱中。其中一个区域与攻击性行为相关联，而另一个区域则不相关。CPP测试分为三个阶段进行：预测试、习得和后测试。在习得或测试试验前1小时将小鼠适应测试房间，所有阶段都在红灯下并在隔音条件下进行。CPP设备（Med Associates）有一个中性的中间区域，允许无偏进入和两个具有不同墙壁和地板的调节室。

1、预测试（Pre-test）：在正式训练之前，让动物在环境中自由探索，记录它们在各个区域中花费的时间，以确定是否存在对某个区域的初始偏好。

2、习得（Acquisition）：在训练阶段，动物在特定区域中经历攻击性刺激（例如，与其他动物的对抗）或非攻击性刺激（例如，简单的环境探索）。这种刺激与特定区域的重复配对，会导致动物学会将该区域与攻击性体验联系起来。

3、测试（Test）：在训练完成后，动物再次被置于环境中，但不再给予任何刺激。观察动物在各个区域中花费的时间，以评估它们是否对与攻击性体验相关联的区域产生了偏好。

这种实验方法可以用来研究攻击性行为的神经机制，以及评估潜在的抗攻击性药物或行为干预措施的效果。通过测量动物对特定环境的偏好变化，可以了解攻击性体验如何影响动物的行为选择。

攻击性奖赏性攻击（SA）：

在RI训练后，每个组进一步分为RI测试期间的AGG或NON。只有一个雄性是非好斗性的，因此只有好斗性的雄性在操作性SA中被测试。在RI测试后的3天，小鼠进行了1天的训练，在这期间它们接触到操作性线索（室内灯和两秒的音调），此外还有同性外来者小鼠进入操作室（每次3次）。在接下来的一天，小鼠每隔一天进行9天的SA训练。在所有攻击性测试期间，研究人员都在场以确保没有小鼠受伤。在训练的第4-8天，平均每日按压3次或更少的小鼠被视为未习得者。  

Fig2 相关测试参数分析

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文献引用：

Aubry, A.V., Joseph Burnett, C., Goodwin, N.L. et al. Sex differences in appetitive and reactive aggression. Neuropsychopharmacol. 47, 1746–1754 (2022).

Newman EL, Covington HE III, Suh J, Bicakci MB, Ressler KJ, DeBold JF, et al. Fighting females: Neural and behavioral consequences of social defeat stress in female mice [Peer Reviewed]. Biol Psychiatry. 2019;86:31255250

Golden SA, Covington HE III, Berton O, Russo SJ. A standardized protocol for repeated social defeat stress in mice. Nat Protoc. 2011;6:1183–91.  

Flanigan ME, Aleyasin H, Li L, Burnett CJ, Chan KL, LeClair KB, et al. Orexin signaling in GABAergic lateral habenula neurons modulates aggressive behavior in male mice. Nat Neurosci. 2020;23:638–50. 

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