大鼠单克隆抗体IgG四种亚型鉴定试剂盒操作说明

产品简介

优品生物的大鼠单克隆抗体IgG四种亚型鉴定试剂盒是一款专为科研用户设计的试剂盒，用于快速、准确鉴定大鼠产生的单克隆抗体IgG的亚型，包括IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG2c。该试剂盒基于酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，通过特异性抗体与大鼠IgG亚型的结合来实现精准检测，适用于科研实验室对单抗分类与研究的需求。

一、试剂盒组成

以下是试剂盒的基本组分及其用途：

组分规格（96T）说明包被抗体（抗大鼠IgG1-4亚型）酶标板1块96孔酶标板，每条检测通道对应单一亚型标准品（大鼠IgG各亚型）4支（每种亚型1支）各种IgG亚型定量标准品生物样本稀释液1瓶样本稀释用，减少干扰酶标二抗（HRP标记）1瓶结合目标抗原，用于显色浓缩洗涤液（20×）1瓶配制工作液用于板洗操作显色液（TMB）1瓶显色反应底物终止液1瓶终止显色反应密封板膜1包避免样本挥发使用说明书1份详细操作步骤指引

二、产品特点与适用范围

灵敏度高 ：可快速识别IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c，大鼠四种IgG类型。

操作便捷 ：标准化流程，无需额外的分析工具。

用途广泛 ：适用于单克隆抗体表征研究、大鼠抗体类别鉴定、免疫疗法等科研领域。

三、样本要求

样本类型

大鼠血清、血浆、细胞上清液或其他细胞培养产物中分泌的抗体检测。

样本保存

样本采集后应立即分装，并储存于低温条件（-20℃或更低）下，避免反复冻融。

样本稀释

初筛实验建议按1:100或更高比例稀释血清样本，防止信号过强。

使用提供的稀释液处理样本，稀释倍数可根据实验需求灵活调整。

四、操作步骤

以下为大鼠IgG四种亚型鉴定试剂盒的标准操作流程：

1. 实验准备

取出酶标板、标准品、试剂等，在室温下平衡30分钟。

准备1×工作液：

稀释20×洗涤液，用去离子水或超纯水按比例（1:20）稀释为工作液。

配备标准品：

按使用说明书稀释标准品，依次配置不同亚型标准曲线的浓度梯度（如50 ng/mL至0 ng/mL）。

2. 加样

标准品加样 ：

将完全稀释后的标准品加入酶标板对应孔，使每种亚型均有完整浓度系列，50 µL/孔。

待测样本加样 ：

将稀释后的样本加入其他指定孔，50 µL/孔（每个样本建议至少做重复孔）。

盖上封板膜，轻轻拍打酶标板底部，确保液体充分接触孔底。

3. 孵育

放置酶标板于37℃恒温箱中孵育30分钟。

4. 洗板

小心去除板中液体，每孔加入200 µL预先配好的洗涤液。

洗涤5次，每次静置10秒后轻轻拍干。（注意：洗板过程中避免液体残留，防止信号偏差。）

5. 加酶标二抗

每孔加入50 µL HRP标记二抗。

再次37℃孵育30分钟。

6. 重复洗板

按照步骤4再次洗涤5次，确保反应充分清除杂质。

7. 显色反应

每孔加入50 µL TMB显色液。

室温避光反应10-15分钟（根据显色深浅控制时间）。

观察孔内颜色变化。

8. 终止反应

每孔加入50 µL终止液（显色液变成黄色）。

9. OD检测

在酶标仪上于450 nm波长处读取各孔的光密度值（OD值）。记录数据并计算分析。

五、数据分析

绘制标准曲线

根据标准品不同浓度的OD值，绘制标准曲线，用于计算样本浓度。

样本判断

样本OD值对应标准曲线跨度位置，计算出该样本IgG亚型及浓度。

四种亚型IgG均需作独立计算和判定。

六、注意事项

环境要求

完成整个实验过程中，建议在洁净环境中操作，防止环境杂质干扰。

避免污染

使用无菌耗材，严禁双向重复使用。

增减步骤时间

若显色过浅，可延长反应时间；反应过强则减少。

储存条件

试剂及板保持2-8℃储存，显色液避光保存。

七、常见问题与解决方案

问题可能原因解决方法OD值偏低样本浓度太低或稀释比不正确增加样本浓度或减少稀释比例各孔差异大洗涤不充分或操作不均匀确保洗板次数和加样一致性标准曲线不准确标准品浓度配置错误或储存不当配置标准品时严格按照说明操作，避免污染

八、储存与有效期

储存条件

试剂盒应保存于2-8℃，避免温度波动或反复冻融。

开封后未使用完的酶标板须密封保存，避免水汽影响。

有效期

产品有效期见包装标签，请于有效期内使用。

优品生物的大鼠单克隆抗体IgG亚型鉴定试剂盒为您的实验提供快速、准确、可靠的解决方案。如需其他技术支持或问题解答，请随时与我们联系！

声明：本试剂盒仅供科研用途，禁止用于任何诊断或临床检测。