人白细胞介素 6（IL - 6）ELISA KIT 检测小知识

一、基础信息

试剂盒有 96T 和 48T 两种规格，保质期 6 个月（以包装标签为准）。用于体外定量测血清、血浆等生物液体中 IL - 6 浓度，仅适用于科研，不可用于临床诊断。

其灵敏度达 0.1pg/mL，对 IL - 6 特异性强，与类似物几乎无交叉反应。重复性佳，板内、板间变异系数均小于 10%，检测范围在 1.5pg/mL - 48pg/mL。

二、检测原理

采用双抗体夹心法，就像精心策划的 “分子抓捕游戏”。先在酶标板上布置抗 IL - 6 抗体 “陷阱”，实验时 IL - 6 会主动 “落网” 与抗体结合，再加入辣根过氧化物酶标记抗体，形成稳固 “组合”。洗板除去游离成分后，加显色底物 TMB，在辣根过氧化物酶催化下，TMB 先变蓝，加终止液后变黄，颜色越深，IL - 6 越多。最后用酶标仪在 450nm 波长测吸光度（OD 值）算浓度。

三、实验必备物品

450nm 酶标仪，负责精准读取数据。

不同量程加样器及枪头（0.5 - 10uL、2 - 20uL、20 - 200uL、200 - 1000uL），助力精确加样。

37℃恒温箱，提供稳定实验环境。

蒸馏水或去离子水。

五、检测前准备

提前 1 小时从冰箱取出试剂盒和样本，室温平衡。

浓缩洗涤液若有结晶，室温溶解后，20ml 浓缩液加蒸馏水或去离子水配成 400ml 洗涤液，余液放回 4℃。20× 洗涤缓冲液按 1：20 用蒸馏水稀释。

六、样品收集方法

血清：全血室温放 2 小时或 4℃过夜，2000prm 离心 20 分钟，取上清，用无内毒素试管。

血浆：用 EDTA 钠盐抗凝，采集后 30 分钟内，2000prm 离心 15 分钟，取上清，避开溶血、高血脂样本。

组织匀浆：PBS（0.01M，pH = 7.4）洗组织，称重剪碎，按 1：9 加 PBS（可加蛋白酶抑制剂），冰上研磨，可超声破碎或反复冻融，5000prm 离心 5 - 10 分钟，取上清。

细胞提取液：贴壁细胞冷 PBS 洗、胰蛋白酶消化，2000prm 离心 5 分钟收集；悬浮细胞直接离心收集。细胞冷 PBS 洗 3 次，每 1×10⁶个细胞加 150 - 200μL PBS 重悬，反复冻融破碎，2000prm 离心 10 分钟，取上清。

细胞培养上清等：2000prm 离心 20 分钟，取上清。

七、样品注意事项

1 周内检测存 4℃，否则按用量分装， - 20℃以下冻存，避免反复冻融，溶血样本勿用。

样品浓度高于标准品最高值需稀释，先做预实验定倍数。

化学裂解液制备样本可能致测值偏差，部分重组蛋白可能与抗体不匹配无法检测。

八、操作步骤

算好预包被板条数，取出所需放 96 孔框架，余板密封存 4℃。

试剂盒和样本室温（25 - 28ºC）平衡 60min。

设置标准品、样本、空白孔。

标准品孔加不同浓度标准品 50μL，样本孔加待测样本 50μL（可稀释），空白孔加样本稀释液 50μL。

各孔加辣根过氧化物酶标记检测抗体 100μL，封板膜封孔，37℃温育 45min。

弃液拍干，每孔加 350μL 洗涤液，静置 20s，甩去拍干，重复 5 次（可用洗板机）。

每孔加底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

每孔加终止液 50μL，15min 内 450nm 测 OD 值。

九、结果计算

标准品和样本设复孔取平均值。以标准品浓度为纵坐标，OD 值为横坐标画标准曲线（R² 越近 1 越好）。通过样品吸光度和标准曲线算浓度（可用软件），稀释过的样品浓度需乘稀释倍数。