动物模型构建与评估丨大鼠痛转化模型

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《动物行为实验指南》共674页，涵盖了常见的实验动物，如小鼠、大鼠和斑马鱼，详细描述了每一种行为测试的实验设计、测试设备、实验流程、评估指标、预期结果、常见问题及解决方法、数据分析、模型应用与局限性等各个方面。它通过快速引导，帮助研究人员高效地掌握实验的每个阶段，减少了查阅文献和寻找方法的时间，成为各类科研人员的重要参考资料。

《动物行为实验指南》共计收录了16种动物行为类型，包括焦虑抑郁、学习记忆、痛觉、运动、恐惧、社交、癫痫、操作、成瘾、视觉、痒觉、味觉、嗅觉、睡眠、斑马鱼行为以及常见动物模型等内容。每一类动物行为下，都详细介绍了多个经典的实验范式，涵盖了超过100种实验方法。

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痛转化模型是一个经典的急性痛转慢性痛模型。在实验操作中，对于敏化组的大鼠，在其左后足足底的皮下部位注入体积为100μL、浓度为1%的角叉菜胶。之后，持续监测大鼠的痛阈变化情况，直至其痛阈恢复到初始的基础水平。此时，再于大鼠左足足背的中央位置，注射25μL浓度为100ng/25μL的前列腺素E2。对于假敏化组的大鼠，在实验过程中，第一次先向其体内注射25μL的生理盐水；待完成第一次注射后，在与敏化组大鼠注射PGE2相同的时间节点，进行第二次注射，此次注射的物质和剂量与敏化组大鼠所注射的PGE2完全相同，即25μL浓度为100ng/25μL的PGE2，以此来设置对照实验条件，便于后续对两组大鼠的各项指标进行对比分析。

Von Frey测痛

将大鼠放置在由铁丝网架构成的透明箱内，使其能够适应箱内环境，这个适应过程持续30分钟。当观察到大鼠停止对笼子的探索行为以及主要的梳理活动后，便开始运用up and down法来测定机械缩足阈（PWTs）。在测定时，选用一套包含0.4、0.6、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、15.0、26.0g共9种强度的纤维丝。测试起始强度设定为4.0g，将von Frey丝垂直地朝向大鼠足底中央部位施力，并且稳定且持续地施加压力达6秒钟。倘若大鼠表现出诸如明显的缩足、甩足、抬足或者舔足等躲避反应，此时标记为“X”，接着更换为临近的更低强度的刺激丝继续进行检测；要是大鼠未呈现任何躲避反应，那就标记为“O”，并更换为临近的更高强度的刺激丝来继续测试。以首次出现“XO”或者“OX”的情况作为开端，在此基础上再连续进行4次检测，这样便会得到一个由“O”或“X”组成的序列，例如“OOXOXOX”。 如果经过计算得出的PWTs大于26.0g或者小于0.4g，那么统一分别以26.0g或0.4g作为其最大或最小值进行记录，以此确保所记录数据的准确性和规范性，为后续的实验分析提供可靠的基础数据。 

高架零迷宫（Elevated Zero Maze，EZM）

是一种用于评估动物（尤其是啮齿类动物如大鼠、小鼠）焦虑样行为的实验装置。它是在传统高架十字迷宫的基础上改进而来，整体呈圆形，没有明显的分区（如十字迷宫的开放臂和闭合臂），但有开放区域和闭合区域。通常由两个相对的开放区和两个相对的闭合区组成。开放区是没有围墙的边缘部分，动物在这个区域没有物理屏障的保护，会使其产生不安全感；闭合区则是有一定高度围墙的部分，能够给动物提供一定的遮蔽和安全感。迷宫一般用金属或木质材料制成，离地面有一定的高度（通常50-100厘米），这也会增加动物的焦虑程度。开放区停留时间和进入次数：动物在开放区停留时间占总探索时间的百分比是一个重要的指标。例如，如果动物在5分钟的测试时间内，只在开放区停留了30秒，那么开放区停留时间百分比为（30秒/300秒）×100%=10%。进入开放区的次数也很关键，正常情况下，焦虑程度较低的动物进入开放区的次数会相对较多。

通过分析动物在迷宫中的运动速度，可以了解其探索的积极性。运动轨迹可以直观地显示动物在开放区和闭合区的偏好。例如，如果动物的运动轨迹主要集中在闭合区，很少进入开放区，这表明动物可能处于较高的焦虑状态。

动物在开放区边缘时，头部下垂到开放区下方的次数也可以作为一个焦虑指标。头部下垂次数越多，可能表示动物对开放空间的好奇和恐惧冲突越强烈，焦虑程度可能越高。

旷场实验

旷场实验是一种经典的行为学测试方法。将动物置于开阔的旷场箱中，通过观察其在一定时间内的活动轨迹、运动距离、进入中心区域的次数等行为参数，来评估动物的自主活动能力、探索行为以及焦虑水平。