基因工程：目的基因的筛选与获取

“高考生物的重点是基因工程。

基因工程的考察重点是PCR。

PCR的核心是引物设计。”

一.重点内容：

1.PCR的原理；

2.PCR引物设计；

2.PCR扩增DNA的规律。

二.教学过程;

情境：制备抗虫棉的大致过程？

回答：通过把Bt基因从苏云金芽孢杆菌中取出来，连接上载体，转入棉花的细胞内，并且让他在棉花细胞内表达，最后检测是否有活性。

Bt基因的碱基序列都是可以在NCBI搜索到，但是如何获得Bt基因的实体呢？

1.PCR的原理

1.1.PCR原理：半保留复制（看课本）；

1.2.回顾细胞内的DNA复制：解旋-引物合成-子链延伸；

注意：子链延伸方向：53。

1.3.PCR的过程：变性---复性---延伸；

重点讲解PCR变性-复性和延伸的对象/温度设计/化学键。

1.4.观看PCR原理的视频；

1.5.列表比较DNA体内复制和PCR。

1.6.针对训练：

黄皮-71页-典型例题；

课本-83页-概念检测-2；

2.PCR引物设计

1.先看一下课本78页，图3-5：

1）.引物结合的对象;

2）.引物结合在模板链的哪一端(5’还是3’)

3）.需要几种引物；

4）.这两种引物的序列相同吗？

5）.这两种引物延伸的方向性？

6）.这两种引物能不能碱基互补配对？

2.完成下面的引物设计：引物长度7nt，标记出方向。

3.针对训练：

4.针对训练：

5.引物内部互补配对和引物之间互补配对：

3.PCR扩增DNA的规律：参考课本78页，图3-5

一个DNA，一对引物（A与B），通过PCR扩增3次：

1）获得的子代DNA个数：

2）含有模板链的DNA个数和所占的比例：

3）含有引物的DNA数目：

4）含有引物的DNA单链的数目：

5）含有引物A的DNA数目：

6）仅含有引物A的DNA数目：

7）复制3次共需引物数目:

8）第3次复制需要引物数目：

拓展思考1：一个DNA，一对引物（A与B），通过PCR扩增n次，共需引物数目？

拓展思考:2：如果模板和引物位置关系如下，第几轮PCR出现单链等长的DNA？所占比例是多少？请你绘图解答。

一节40分钟的课堂，

紧赶慢赶，就讲这么多，

多一点也讲不了。

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