CCK8实验常见问题与解决方案

在细胞生物学和药物研发领域，CCK8（Cell Counting Kit-8）因其操作简便、灵敏度高而成为检测细胞活性和增殖的常用工具。然而，实验结果容易受实验细节影响，掌握以下注意事项至关重要。

一、试剂保存与使用

避光保存：CCK8试剂中的水溶性四唑盐对光敏感，需-20℃避光保存，避免反复冻融。使用前回温至室温，确保试剂活性。

避免污染：移液时需使用无菌枪头，防止微生物污染导致试剂失效。

二、细胞处理要点

细胞密度把控：细胞过密会提前耗尽培养基营养，导致假阴性；过少则信号弱。建议预实验确定最佳接种数（通常96孔板每孔500-5000个细胞）。

均匀铺板：细胞需分散均匀，避免边缘孔因蒸发差异影响结果。可用预孵育（37℃, 1-2小时）稳定细胞状态后再加试剂。

三、反应条件优化

孵育时间：CCK8与细胞孵育时间通常为1-4小时。时间过短显色不足，过长可能细胞死亡。建议每2小时用酶标仪测一次（450nm波长），找到最佳时间点。

避免干扰：

培养基中的酚红或高浓度血清可能干扰吸光度，需设置空白对照（含培养基+CCK8，无细胞）。

若药物本身有颜色，需提前检测药物与CCK8的兼容性。

四、数据解读与验证

重复实验：每组至少设3个复孔，多次独立实验取均值，减少操作误差。

动态监测：对于药物处理，建议设置多个时间点（如24h、48h、72h）绘制生长曲线，更全面反映细胞状态。

对比验证：可结合台盼蓝染色或MTT法交叉验证结果，提高可信度。

五、安全与环保

CCK8试剂含微量毒性物质，需佩戴手套操作，废弃液按实验室规范处理，避免直接接触皮肤或环境。

为何选择睿信CCK8？

睿信CCK8采用高稳定性WST-8底物，灵敏度较传统MTT提升3倍，且无需配制，即开即用。试剂兼容性广，适用于贴壁/悬浮细胞、细菌甚至3D培养模型检测。

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