斑马鱼行为篇（121）：斑马鱼重复社交挫败范式

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该实验的目的是在斑马鱼中建立一个重复社交挫败模型，以研究社交挫败压力对斑马鱼行为和生理的影响。通过模拟自然环境中的社会竞争和攻击行为，研究人员可以探索斑马鱼如何响应重复的社交挫败，以及这种压力如何影响它们的行为、生理状态和心理健康。这种模型有助于理解社交挫败压力在其他物种中的作用，包括人类，以及开发可能的干预措施来减轻社交挫败压力的负面影响。

鱼的社交性评估：

社交偏好测试测试水箱（51 cm × 11 cm × 12.5 cm；水位 9 cm）通过透明的 PVC 隔板分为5个区域。把一只斑马鱼放在角落区域（区域1或区域5）作为社交刺激。紧邻社交刺激的区域（区域2或区域4）被定义为社交区。测试鱼被引入到区域3，即测试水箱的中心。经过3分钟的适应期后，移除区域3的两个隔板，使测试鱼可以自由探索从区域2到区域4的区域，并记录测试鱼的行为7分钟。计算测试鱼在前5分钟内在社交区花费的时间，以评估测试鱼的社交性。

实验步骤：

使用大小匹配的（体长差异<1毫米）4-12个月大的雄性斑马鱼。在战斗前一天，鱼被MS222麻醉，鳍被剪掉以识别每条鱼。对于第1天的战斗，剪掉尾鳍的上部或下部，对于第2天的战斗，剪掉了背鳍或臀鳍以识别第1天的败者和第2天的胜者。每条鱼被隔离在700毫升的水箱中过夜。第二天，鱼对被放入一个新700毫升的水箱中，水箱由不透明的PVC隔板分隔。30分钟适应后，移除不透明的PVC隔板，它们的互动录像30分钟。

计算每次战斗的潜伏期（从移除隔板到第一次环绕的时间）和持续时间（从第一次环绕到胜者/败者确定的时间）。 

首先进行成对雄性战斗并获得了单次败者，单次败者被隔离过夜。第二天，将单次败者与大小匹配的新对手配对，以诱发战斗并分析单次败者的战斗行为。准备大小匹配的野生型鱼，并在第1天进行了成对的雄性战斗。第1天的胜者和第1天的败者被配对在同一个水箱中过夜，以便第1天败者持续暴露于第1天胜者的攻击行为。在第2天，使用与第1天不同的新鱼对进行了成对的雄性战斗。然后，将这次战斗的胜者与第1天的败者在一个由不透明PVC隔板分隔的水箱中配对。在30分钟适应期后，移除隔板，允许15分钟的互动，记录该互动。鱼通常在15分钟内开始战斗行为。此外，第1天的败者和第2天的胜者通常一旦开始战斗行为，就会在15分钟内结束战斗。记录后，斑马鱼配对过夜。从第3天到第6天，将第1天的败者与不同的第2天胜者配对，这样第1天败者每天都会暴露于来自不同第2天胜者的重复社会败压力。在第7天，那些暴露于6天重复社会败的第1天败者被进行了新水箱测试和社交偏好测试，以评估它们的焦虑水平和社交能力。 

在斑马鱼中诱导重复社交挫败的行为范式

评估：

计算第1天失败者每一天的战斗率。在计算中，“战斗行为”指的是斑马鱼战斗中的一系列行为，包括展示、绕圈、咬斗和胜负判定。当鱼对没有表现出战斗倾向时，分别将战斗潜伏期计算为900秒，战斗持续时间计算为0秒。为了评估第1天失败者的屈服行为，在胜负判定后的5分钟内测量它们表现出逃跑和僵直行为的时间。