在检测试纸条上,固定有针对不同小鼠 IgG 亚型(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3)的特异性捕获抗体。当含有小鼠单抗的样本滴加到试纸条加样区后,样本中的抗体在层析作用下向检测区移动。若样本中存在对应亚型的小鼠单抗,便会与检测区的特异性捕获抗体结合,形成免疫复合物,进而通过显色反应在检测线处呈现出肉眼可见的条带。
操作流程:
样本准备:将待鉴定的小鼠单抗样本用适当的缓冲液进行简单稀释,确保抗体浓度在检测范围内。
加样操作:使用移液器吸取 10 - 15μL 稀释后的样本,缓慢滴加到检测试纸条的加样孔中。
结果判读:加样后,在 5 - 10 分钟内进行结果观察。若仅在质控线(C 线)出现一条红色条带,表明检测无效;若在质控线(C 线)和某一检测线(T 线,如 T1 代表 IgG1、T2 代表 IgG2a 等)同时出现红色条带,则对应检测线所代表的 IgG 亚型即为样本中抗体的亚型;若质控线(C 线)和所有检测线均未出现条带,也表明检测无效。
特点:快速高效,整个鉴定过程仅需 5 - 10 分钟;操作简便,无需复杂仪器设备;高准确性,采用高特异性的捕获抗体,有效避免交叉反应;成本低廉,相比传统方法所需试剂成本低;便于携带,检测试纸条体积小巧,适用于多种场景。
基于酶联免疫吸附试验(ELISA)的鉴定方案5
原理:采用间接法酶联免疫吸附试验,酶标板预先包被针对小鼠 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG2c、IgG3 及总 IgG 的特异性抗体,将待测样本处理后加入到酶标板中,再加入标记抗体孵育,最后通过显色液显色来判断抗体类型。
操作流程:
样本准备:收集小鼠血清、血浆、细胞培养上清液等样本,如有需要可进行稀释和预处理,确保样本质量满足检测要求。
加样:将处理后的样本加入到预包被的酶标板中,同时设置标准品孔和空白对照孔。
孵育:将酶标板在适当条件下孵育,使样本中的抗体与包被的特异性抗体充分结合。
洗板:孵育后用洗涤液清洗酶标板,去除未结合的物质。
加标记抗体:加入 HRP 标记的二抗,再次孵育,使二抗与结合在板上的抗体特异性结合。
显色和终止:加入显色底物(如 TMB),等待显色反应发生,随后加入终止液终止反应。
结果分析:使用酶标仪在特定波长下读取各孔的吸光值(OD 值),通过与标准曲线对比,确定样本中 IgG 各亚型的含量和浓度,从而判断抗体的亚型。
特点:灵敏度高,最低检测限可达 ng/mL 级别;特异性强,抗体专一性强,可准确鉴定各亚型;结果直观易读,通过酶联免疫实验平台可快速生成定性与定量的检测结果;可同时检测多种亚型,一次实验即可分析 IgG 所有六种亚型,节约时间和成本。
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