药物与蛋白亲和力检测（MST法）实验服务

佰莱博生物：一站式分子互作实验服务

01.

公司介绍

湖北佰莱博科技有限公司是MST生物分子互作实验服务的领军者，公司拥有6年的MST实验服务经验，已完成2500+靶点分子检测，在分子间相互作用研究方面经验丰富。利用领先的Monolith NT.115和Monolith X型MST分子互作仪，我们能够提供广泛的检测服务，精准分析药物与蛋白质的亲和力。我们的分子互作技术团队为每一位客户提供一对一的高品质定制服务，满足大学、医院、科研机构及生物制药企业对药物与靶蛋白亲和力分析需求。

02.

技术原理

微量热泳动

MST

MST（MicroScale Thermophoresis）基本原理：

溶液中的分子在温度梯度场中定向从高温区向低温区移动，不同分子由于其尺寸、水化层和电荷等物理化学性质的差异，其热泳动速率也各不相同。

采用MST（MicroScale Thermophoresis）微量热泳动技术检测分子间相互作用的基本原理：

检测时将互作中的一个分子进行荧光标记，在MST技术中称之为Target；与之互作的另一个分子称之为Ligand。Target分子与Ligand分子结合形成复合物，复合物分子的尺寸、水化层和电荷等性质相对于Target分子的改变都可以导致复合物分子的热泳动速度相对于Target分子的热泳动速度变快或者变慢。

进行MST实验时将Ligand分子按照2倍的浓度梯度稀释配制16管溶液，然后和Target分子等体积混合，吸入毛细管后放入仪器中进行检测（图1B）。检测时仪器中的红外激光束对毛细管的检测区域正中心进行加热（图1B），激光束周围的溶液形成温度梯度场，分子在温度梯度溶液中由高温区域向低温区域定向移动，并且移动速度和分子的尺寸大小、水化层及电荷有关。激发光激发Target分子上的荧光基团，通过发射光检测器记录温度梯度场中Target分子发出的荧光强度变化情况（图1C），图1C中的横坐标为时间，纵坐标为荧光强度，红色曲线为MST-Trace。

图1D左图中每一条曲线是一根毛细管中的荧光强度实时记录曲线（MST-Trace），记录了温度梯度场中荧光强度随时间的变化。然后将荧光强度的数值做纵坐标，配体浓度做横坐标进行拟合作图，软件自动计算得到该结合的亲和常数KD。

图1 微量热泳动技术(MST)原理

核心优势

MST

1.无需固定分子，分子在溶液中处于自由状态

2.不受互作的两个分子的分子量比值大小的限制

3.适合困难样品：膜蛋白、难以表达纯化的蛋白（免纯化MST）

4.蛋白消耗量极低（低至10ug）

5.可在任意缓冲液中进行检测

6.可检测细胞裂解液（免纯化MST）

03.

实验流程

微量热泳动（MST）技术检测蛋白质与小分子药物亲和力为例（荧光标记的蛋白质作为Target，未被标记荧光的小分子药物作为Ligand分子，见图2）

1.蛋白标记：将蛋白质（Target分子）与染料分子共孵育30min，使蛋白标记上荧光，并使用脱盐柱对已标记的蛋白进行纯化。

2.体系配制：将Ligand分子2倍稀释（共16个浓度），与标记的蛋白共孵育反应15min并上样至毛细管中。

3.检测分析：将毛细管放入仪器中进行微量热泳动（MST）检测，软件分析计算分析蛋白与Ligand分子间的亲和力。

图2 微量热泳动技术(MST)原理

04.

MST检测常见的药物种类

天然产物及其类似物、中药单体、细胞代谢物、小分子化合物、小分子药物

05.

常见生物分子间的亲和力范围

06.

蛋白与药物互作典型案例

6.1 MST测定乳酸和人AARS1蛋白的亲和力

图3 MST技术测定乳酸和人AARS1蛋白的亲和力

6.2 MST测定C188-9与STAT3蛋白的亲和力

图4 MST技术测定小分子药物C188-9与STAT3的亲和力

07.

服务流程

服务优势

设备先进：

Monolith NT.115、Monolith X等领先机型，原厂耗材

团队专业：

6年经验资深分子互作实验团队，2500+靶点分子实验经验

检测类型多：

亲和力测定、多元互作（竞争结合）、免纯化MST

数据可靠：

多维度优化确保高质量检测数据

服务高效：

一对一服务，最快48小时交付结果

技术互补：

SPR/BLI、ITC、分子动力学模拟、CETSA、DARTS

佰莱博生物在提供一流的微量热泳动MST实验服务的同时，结合生物物理技术、生物化学技术、细胞生物学以及计算机模拟技术，提供药物与靶蛋白结合检测服务。

具体服务内容如下：

(1)生物物理实验：

SPR、MST、ITC、BLI、nanoDSF、CD（圆二色光谱）

(2)生物化学实验：

CETSA、Small Pull-Down、DARTS

(3)细胞生物学实验：

小分子免疫荧光（小分子荧光共定位）

(4)计算模拟实验：

虚拟筛选、分子对接、分子动力学模拟

联系电话：027-88316765

微信号：Yu13377873161 (北区)

B18171330319 (南区)