DARTS-WB实验服务介绍

佰莱博生物：一站式分子互作实验服务

01.

实验原理

DARTS（drug affinity responsive target stability）全称为药物亲和反应的靶点稳定性分析。与游离的蛋白质相比，当小分子配体与靶蛋白结合后，由于氢键等相互作用，蛋白小分子复合物通常会具有更高的稳定性。

用蛋白酶处理样品时，与小分子结合的蛋白拥有较高的水解抗性，结合了小分子的靶蛋白水解程度较低（与未结合小分子的蛋白相比），从而可以利用western-blot对实验组和对照组中目的蛋白的水解程度进行定性分析，从而验证蛋白与小分子之间的相互作用。

02.

实验流程

DARTS

1. 细胞裂解，提取总蛋白（注：使用温和的裂解液，保持蛋白活性）。

2. 向总蛋白中添加药物小分子孵育，同时对照加入等体积的实验组中溶解小分子的溶剂。

3. 向上述实验组和对照组中分别加入等量蛋白酶孵育。

4. western-blot验证小分子和靶蛋白之间的相互作用。

WB

1. SDS-PAGE 电泳，利用电场使蛋白质按分子量大小进行分离。

2. 蛋白转膜，在电场的作用下，蛋白质从凝胶迁移到膜上。

3. 封闭，使用含有5%脱脂奶粉对膜进行封闭，防止抗体与膜上的非特异性部位结合。

4. 一抗孵育，将膜与特异性的一抗（针对目标蛋白的抗体）孵育，通常在4°C下过夜，确保抗体与膜上的目标蛋白结合。

5. 二抗孵育，将膜与一抗对应的二抗孵育，二抗通常具有酶标记（如辣根过氧化物酶HRP），便于后续检测。

6. 化学发光检测，使用化学发光底物（如ECL）与HRP反应，产生光信号，光信号强度与目标蛋白的表达量成正相关，使用成像系统（如化学发光成像仪）可以进行检测并记录信号。

DARTS-WB基本实验流程

样本需求

1. 细胞：5×107或等量的细胞裂解液

2. 抗体：一抗不少于40ul

3. 药物：1-2mg

（本实验需进行多次优化重复，故细胞及抗体需求量较大）

实验周期

两个月

结果交付内容

1. DARTS-WB实验结果原图

2. DARTS-WB实验报告

03.

应用分享

应用一：DARTS技术筛选人参三醇作用靶标UFL1[1]

人参（Panax ginseng，C.A. Mayer）在中国被用作药用物质已有两千多年的历史，已被证明对与神经、心血管、泌尿、免疫和消化系统相关的各种疾病具有治疗作用。人参皂苷是人参中负责其药理作用的主要活性成分，人参三醇（Panaxatriol）是这些人参皂苷中最丰富的成分，具有显著的药理作用。

本研究通过DARTS实验，结合质谱鉴定，鉴定到UFL1为人参三醇的潜在靶标，并通过DARTS-WB验证了人参三醇和UFL1之间的相互作用。

我们重复了文献中的DARTS-WB实验，验证人参三醇和UFL1之间的相互作用，结果如下：

应用二：DARTS技术验证芹菜素与PRDX6的相互作用[2]

芹菜素是一种具有抗氧化和抗炎作用的黄酮类化合物，表现出针对衰老细胞的抗衰老能力。该化合物阻断了ATM/p38MAPK与HSPA8之间的相互作用，防止急性应激相关表型（ASAP）向衰老相关分泌表型（SASP）的转变。

本研究中，使用了DARTS技术通过靶点鉴定验证研究结果。数据显示，在与芹菜素孵育后，实验组相对于对照组有16种蛋白质显著上调。在生物素标记与DARTS两种方法共同鉴定出的三种蛋白质中（PRDX6、SEPT11和YWHAE），推测芹菜素可能直接与PRDX6结合。

我们重复了文献中的DARTS-WB实验，验证芹菜素与PRDX6的直接相互作用，结果如下：

04.

参考文献

1. Kuang B, Geng N, Yi M, et al. Panaxatriol exerts anti-senescence effects and alleviates osteoarthritis and cartilage repair fibrosis by targeting UFL1. J Adv Res. Published online October 21, 2024. doi:10.1016/j.jare.2024.10.016

2. Hongwei Z,Qixia X,Zhirui J,et al.Targeting Senescence with Apigenin Improves Chemotherapeutic Efficacy and Ameliorates Age-Related Conditions in Mice.  Adv  Sci (Weinh).Published  online  April  23,2025.doi: 10.1002/advs.2024.12.950.

佰莱博生物提供全方位的生物分子相互作用检测服务，涵盖生物物理、生物化学、细胞生物学以及计算机模拟等多个技术。

具体服务内容如下：

生物物理技术：

SPR、MST、ITC、BLI、nanoDSF、CD (圆二色光谱技术)

生物化学技术：

CETSA、Small Pull-Down、DARTS

细胞生物学技术：

小分子免疫荧光(小分子荧光共定位)

计算机模拟技术：

虚拟筛选、分子对接、分子动力学模拟、基于AI的蛋白质设计

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