【教程】如何快速测量细胞划痕宽度？

聊点学术

细胞划痕实验可谓是性价比超高的一个小实验了。可以在不额外购买实验设备的情况下，一定程度地评价肿瘤细胞或者成纤维细胞的迁移能力。

在课题组经（Pin）费（Qiong）的限制下，这个实验成为很多老板的最爱。

细胞划痕实验本身的操作很简单，网上有很多教程，此处不赘述。当你辛辛苦苦拿到了下面这张照片时，说明你已经成功了一大半。

接下来的工作就是测量，本文将以此为例，写出测量的图文教程。

1. 下载并安装Image Pro Plus。

2. 点击File→Open，打开你需要测量的图片。

3. 增强细胞划痕边界的信号，以提高IPP识别准确度。点击Process，点击过滤器Filters。

4. 在Filters弹窗中，依次选择以下参数，需要做3步。

（4.1）在Edge选项下，选择Sobel。然后鼠标拖右侧的小窗口，将细胞划痕的边缘拖到这个窗口处，意在增强这个边界。

点击Apply之后，可以看到目标图片已经发生改变，边界更加清晰了。

（4.2）在Morphological选项下，选择Close。然后鼠标拖右侧的小窗口，使得细胞占满这个窗口。此步意在通过算法将细胞区域中的空隙都填充上颜色，以提高IPP的自动识别准确度。

点击Apply之后，可以看到目标图片再次发生改变。

（4.3）在Enhancement选项下，选择Lopass，选择5X5，然后鼠标拖右侧的小窗口，使得划痕边界处在这个窗口。此步骤意在调整划痕边界的平滑度。

点击Apply之后，可以看到目标图片又一次发生改变。

5. 增强图片的对比度。

（5.1）点击Enhance，选择Contrast Enhancement，调出下面的设置界面弹窗。

（5.2）拉动图中的曲线，以获取合适的对比度。（当然你也可以点击弹窗中Save选项，保存这个对比度文件。后面测量其它图片时，到了这一步可以点击Load调出设置文件。这种操作更有利于减小测量误差。）

6. 点击矩形工具，将图中的细胞宽度框选。如下图。

7. 点击Measure中的count/size选项，弹框中点击measrue，再点击select measurement。测量参数选择Area和Box Height。调整Area最小测量值为1000，以便于过滤小面积区域。（注意：如果你的细胞划痕图像是横着的，那就要选择Box width）。点击OK。

8. 最关键的一步。在manual模式下，点击select colors，进入选色界面。在HSI模式下通过调整0-255数值或拉动图中曲线，保证我们画的矩形选框中尽可能的被填满红色。

同样的，你可以点击弹窗中的File按钮来保存你的设置文件，测量其它图片时之间调用，以减小测量误差。完成后点击close。

9. 在count/size界面选择Option，然后按照下图进行设置。最关键的是选择filled。完成后点击OK。

10. 点击count，可以看到划痕区域被选择为多个测量区域，且存在一个最大测量区域被红色全部充满。这样的测量才是符合的。

11. 点击View，查看数据。其中最大面积及其对应的高度值就是我们需要的数据。

12. 细胞划痕宽度

细胞划痕平均宽度=细胞划痕最大测量面积 / 对应的长度

（eg，本例中细胞划痕最大的测量面积是1954623，对应长度为2531，那么细胞划痕平均宽度就是772.3）

13. 测量单位的问题

首先，你的所有图片应该是在同一倍数的镜下拍摄，一般10X。此时你采用IPP测量的宽度数值单位是“像素”，如果是多组间的比较，是否有单位对于组间比较无影响。

至于这个像素所代表的实际尺寸，则必须在该显微镜10X倍数下重新拍摄一个标尺，然后使用这个标尺进行像素与尺寸的换算，最终得到细胞划宽度的实际尺寸。