AbMole细胞实验试剂篇丨红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer）

红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，AbMole，M58116）是一种能够从血液或组织细胞样品中裂解并去除无细胞核红细胞的溶液。在免疫学、血液学与肿瘤学研究中，血液与组织样本的有核细胞分析始终是一个绕不开的难题。外周血中含有大量的红细胞，其数量约为有核细胞的数百甚至上千倍，而真正承载研究价值的中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞等有核细胞仅占很小的比例。若直接以全血或富含红细胞的单细胞悬液进行流式细胞术、免疫细胞分选、核酸提取或蛋白分析，海量的红细胞会严重干扰散射光信号、掩盖稀有细胞群、提高非特异性背景，甚至因血红蛋白与血红素的存在而抑制下游PCR与酶学反应。因此，如何在不损伤有核细胞的前提下高效清除红细胞，便成为绝大多数血液和免疫研究的相关实验无法回避的前处理环节，而红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，AbMole，M58116）正是针对这一需求而设计的即用型解决方案。

一、什么是红细胞裂解液

红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，AbMole，M58116）是一种专为哺乳动物全血及组织单细胞悬液设计的即用型缓冲液，核心作用是：选择性裂解并清除无核红细胞，同时最大限度地保护淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞等有核细胞的活性与功能完整性。针对人、小鼠、大鼠等哺乳动物样本进行了适配，属于血液样本前处理的高效工具。

二、作用机理

红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，AbMole，M58116）的工作基础是渗透压原理。溶液中的铵离子（来自氯化铵）能够自由进入红细胞膜，与胞内的血红蛋白等组分发生作用，使红细胞内有效渗透颗粒数目增多、渗透压升高；为了维持内外平衡，水分在渗透驱动下大量进入红细胞，导致细胞不断吸水膨胀，最终使细胞膜无法承受张力而破裂、溶解。与此同时，溶液中的碳酸氢钾起到维持pH稳定与缓冲的作用，EDTA则通过螯合钙镁离子保护有核细胞的膜稳定性，并减少细胞聚集。由于有核细胞对铵离子的耐受性明显强于无核红细胞，因此在推荐的孵育时间与浓度范围内，该体系能够在清除红细胞的同时保留绝大多数有核细胞的活性。需要留意的是，有核红细胞（如鸡红细胞、造血过程中的幼红细胞）并不能被该体系有效裂解。

三、为什么需要这个试剂

红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，AbMole，M58116）是血液学研究或者免疫学研究的重要工具之一，是因为在多数研究场景中，红细胞带来的干扰是实质性且影响实验结论的。首先，在流式细胞术中，红细胞与碎片会占据散射光通道与荧光通道的背景，使淋巴细胞、单核细胞等目标群体的圈门困难，尤其在检测稀有细胞亚群时可能直接导致漏检；其次，在全血直接进行免疫细胞分选时，过量的红细胞会堵塞分选柱或磁珠载体，降低分选效率与纯度；此外，血红蛋白与血红素是多种分子生物学反应的强抑制剂，若样本中残留过多红细胞，会显著降低PCR扩增效率与酶联免疫测定的信噪比；最后，在进行单细胞测序与单细胞悬液制备时，红细胞碎片的污染会干扰细胞计数与建库。传统的手工配置裂解液存在批次间pH与渗透压不稳定、成分纯度参差等问题，而商品化即用型红细胞裂解液配方固定、质量可控能显著提升结果的可重复性。

四、主要应用场景

红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer，AbMole，M58116）在生命科学研究中的典型应用贯穿多个方向。在外周血单个核细胞分离中，常在使用Ficoll密度梯度离心后，用裂解液处理残留的红细胞，以获得高纯度的外周血单个核细胞（PBMC）；在流式细胞免疫分型与细胞表面标志物的分析中，全血样本经裂解后可进行抗体染色与多参数检测；在免疫细胞分选与体外培养中，裂解处理后的细胞能直接进入磁珠分选、流式分选或培养体系；在DNA/RNA提取与蛋白分析中，通过去除红细胞可显著降低血红蛋白等杂质的干扰，提高提取纯度；此外，在小鼠脾脏、淋巴结等造血组织单细胞悬液的制备中，红细胞裂解液同样是去除大量红细胞的关键步骤。可以说，从血液免疫学到肿瘤免疫再到单细胞研究，红细胞裂解液都是衔接样本采集与下游分析的关键枢纽。

五、使用方法参考

不同样本的裂解流程略有差异，以下方案供参考：

对于组织细胞样品：

1. 新鲜组织经过胶原酶或胰酶等消化处理，通过适当方法分散成细胞悬液，离心弃上清。

2. 加入3-5倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入3-5ml的红细胞裂解液。本步骤在室温或4℃操作均可。

3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5. 洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。

6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

对于血液样品：

1. 取新鲜抗凝血，400-500g离心5分钟，离心弃上清。

2. 加入6-10倍细胞体积的红细胞裂解液，轻轻吹打混匀，裂解1-2分钟。例如细胞沉淀的体积为1ml，则加入6-10ml的红细胞裂解液。本步骤在4℃操作均可。注意：对于鼠的血液，裂解1-2分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至4-5分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。

3. 400-500g离心5分钟，弃红色上清。4℃离心效果更佳。

4. 如果发现红细胞裂解不完全，可以重复上述步骤2和步骤3一次。通常极微量的红细胞不会影响后续的一些检测。

5. 洗涤1-2次：加入适量PBS、HBSS、生理盐水或无血清培养液，重悬沉淀，400-500g离心2-3分钟，弃上清。可再重复1次，共洗涤1-2次。洗涤液的用量通常应至少为细胞沉淀体积的5倍。4℃离心效果更佳。

6. 根据实验需要用适当溶液重悬细胞沉淀后即可进行计数等后续实验。

注意：对于微量或少量的血液样品，可以在第一步中不进行离心弃上清的操作，直接在第二步中加入10倍血液体积的红细胞裂解液，并在室温或4℃裂解4-5分钟。对于鼠的血液，裂解4-5分钟已经足够，对于人的外周血，宜延长裂解时间至10分钟，但通常不宜超过15分钟，并且裂解过程中宜适当偶尔摇动以促进红细胞裂解。后续步骤相同。

六、注意事项

1、本裂解液为无菌产品，请注意保持无菌，使用本产品时宜在超净工作台内进行。

2、如果经过红细胞裂解液处理后的样品后续用于总RNA的提取，在处理细胞时不必使用经过DEPC处理过的溶液。

3、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗等任何非科研用途。

参考文献

[1] Methods Enzymol. 2020;639:289-311

[2]  Bio Protoc. 2023 Dec 20;13(24):e4903.

[3] BMC Immunol. 2015 Aug 26;16:48.

[4] Curr Protoc. 2022 Aug;2(8):e514.