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单细胞测序微流控技术应用

基于微流体封装单个细胞并提供理想微反应器,每个功能上相当于微孔板一个孔,但反应体积小一百万倍。每秒可以产生数千个单独隔室,表面活性剂用于降低表面张力并防止融合。...不过,细胞封装是随机,并且很大程度上依赖于泊松统计,因此基于微流体技术可能会产生空和包含多个细胞。...方法 目前最流行高通量平台是基于微流体,即微,优点包括低试剂和样品体积,以及短细胞加载期。...水凝胶珠溶解,释放出寡核苷酸与 mRNA 杂交,逆转录反应在内进行。然而,inDrop 主要缺点是细胞捕获效率极低,每个细胞只能检测 20-50 个转录本。...珠子连同附着寡核苷酸和退火 mRNA 都从释放出来并组合到一个管,然后进行逆转录 10X genomics使用Gel bead in EMulsion (GEM) 中封装数千个单细胞,获得数据比

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浅谈单细胞转录组测序捕获效率提升

之后将细胞混合,将细胞过量载入流道,以便大多数接收多个细胞或细胞核。每一个拥有round2 barcode。...round1 条码同一拆分池孔所有细胞之间共享,round2 条码同一所有细胞之间共享,但两个条码组合唯一地标识了源自同一单个细胞转录本。...电润湿技术就是其中一种,利用介电润湿效应驱动动作原理在于通过对嵌介电层下微电极阵列施加电压来改变介电层与附着于其表面导电润湿特性,使-固接触角发生变化,造成两端不对称形变,促使内部产生压强差...,从而实现运动操作与控制以及对单细胞捕获。...)基础上进行优化,利用光束同时光敏感材料上产生电势场,以低于OT技术万分之一能量,实现大量单细胞同时操作。

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单细胞时代 || NGS技术实现

微流体液装置也被引入,用于将单个细胞封装在含有试剂体积。然后,细胞裂解,分选,准备文库和测序。...Droplet-Based scRNA-seq Technologies 介绍了微流控技术,主要涉及将单细胞封装在惰性载体油。载体油使用使能够移动、合并、分离、加热或存储。...该技术将单个细胞封装在,大大降低了每个细胞封闭体积,特别是与传统纳米技术中常用微升体积相比。...细胞被分离成小滴后被裂解,mRNA分子多聚(A)尾与小珠上寡聚(dT)尾杂交,形成单细胞转录组附着在其上微粒子((STAMPs)。然后被打碎,并在单管接受RT。...通过加入50 mM二硫苏糖醇(DTT)缓冲,可以裂解附着寡核苷酸上生物素间隔臂上二硫键,从而产生高纯度dna,单细胞被分选和裂解。

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利用pythonexcel画图实现方法

当然,其实用画图这个词不甚严谨,实际上是利用opencv遍历每一个像素rgb值,再将其转化为16进制,最后调用openpyxl进行填充即可。 1.1、实现效果 效果如下图 ?...第二行是将第一行得到数组转化为DataFrame对象并存储tmp变量,以便第三行处理。 第三行是利用DataFrameapplymap将r值转化为16进制。...这里就是本方法也就是方法3调用方法2。唯一区别就是有没有返回值。 我们这样方法3调用方法2然后方法2调用方法1。这样在对象外时候我们就只用对象实例化并调用方法3即可实现功能。...第三行、第四行就是调用openpyxl.load_workbook打开我们方法1新建工作簿test工作表 五到七行两个循环嵌套很容易懂就是利用循环遍历每个工作表 第八行代码可能可以简化...到此这篇关于利用pythonexcel画图实现方法文章就介绍到这了,更多相关python excel画图内容请搜索ZaLou.Cn以前文章或继续浏览下面的相关文章希望大家以后多多支持ZaLou.Cn

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PNAS:大规模并行筛选合成微生物群落

与其他微流体系统一样,kChip平台适用于荧光和无标签光学分析,并使用小体积。此外,kChip微孔长度尺度(约100 - 1000 μm)是相互作用驱动微生物群落组装自然生态尺度。...将kChip放大2倍扫描,根据其颜色编码(~ 12-15分钟)来识别每个微孔通过暴露于交流电场(4.5 MHz, 10000 - 45000伏)实现融合。...然后,通过暴露在交流电场各自微孔合并,产生平行合成群落。群落表型可通过光学分析进行跟踪,包括荧光蛋白表达和呼吸驱动还原刃天青产生试卤灵。(B)显示了不同类型微孔分组和合并。...为了比较kChip与传统方法性能,获得了培养板和常规96孔板培养板(SpectraMax平板)利用率曲线[即在最小培养基,不同单一碳源每种菌株生长曲线]。...结果表明,k = 2芯片和96孔板上,由GFP或YFP信号产生利用率剖面与芯片一致性有很强相关性(Pearson r = 0.868) k = 2芯片上测量标记菌株和未标记菌株利用曲线

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【Cell】有关生物大分子凝聚体以及相分离知识汇总(三)

研究生物凝聚过程一个步骤是体外重建关键成分简化装配,并测试这个装配是否通过LLPS形成。...更确切方法是定义一个饱和浓度Csat,其中当C Csat,密集珠出现,其体积分数fD总浓度进一步增加时增加,而光相中浓度CL保持恒定(见图...比较不同样本时,孵育时间和成像参数(例如,盖玻片上检测或者玻片上方立即检测)应保持恒定。这是因为会沉积在显微镜滑片表面。这可能导致对密集相体积分数过高或过低估计。...通过浑浊度测量检测-相分离(LLPS) 溶液,直径在数十到数百纳米(nm)量级尺度集合体会散射可见光,可以通过光密度测量(通常在340 nm或400 nm波长下)或直接静态光散射进行检测...取出轻相一部分,光谱学测定其浓度(例如,通过测量280 nm处吸光度,在这种情况下应稀释溶液以防止再形成,或使用比色分析法,或者使用荧光标记蛋白时测定荧光强度)。

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单细胞RNA-seq前世今生

其中,三种最广泛使用选项是基于微孔,微流体和选项。 ? 对于基于良好平台,使用例如移管或激光捕获分离细胞并置于微流体孔。...通常,微流体平台中仅捕获约10%细胞,因此如果处理稀有细胞类型或非常少量输入则它们是不合适。此外,芯片相对昂贵,但由于反应可以以较小体积进行,因此可以节省试剂。 ?...基于方法背后想法是将每个单独细胞与珠子一起封装在纳升内。珠子装载构建文库所需酶。特别地,每个珠子包含独特条形码,其附着于源自该细胞所有reads。...因此,可以合并所有,一起测序,并且随后可以基于条形码将reads分配给原始细胞。Droplet平台通常具有最高通量,因为库准备成本大约为每个细胞0.05USD。...例如,如果人们对表征组织组成感兴趣,那么将允许捕获非常大量细胞基于方法可能是最合适

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单细胞RNA测序综述汇总—肿瘤研究新工具

测序前准备:需要分离出感兴趣单细胞,即细胞捕获,捕获技术决定了细胞如何被筛选、获取怎样测序外补充信息、数据产量,目前主要是基于微孔、微-微液流捕获方法: 基于微孔阵列高通量scRNA-Seq...,单个细胞与单独独特条形码mRNA捕获珠共包裹在物理隔离微孔(每个细胞反应体积:~100P1)。...基于微流控scRNA-Seq(10X Genomics平台),单个细胞被封装成纳米升大小,其中包含裂解缓冲附着Toyota opearl HW-65S珠子上寡聚条形码。...封装时,单细胞被裂解,RNA通过与珠子上寡聚物Poly(T)尾部结合而被条形化,从而产生所谓STAMP(附着微粒上单细胞转录物)。然后打破乳状,回收悬浮珠子,进行一次逆转录反应。...其二 是将FACS sort到细胞微流控芯片中同时进行逆转录和PEA而不分离裂解。该法可以同时检测96个mRNA/38个蛋白。这两种方法检测蛋白与mRNA数量与质量均有限。

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如何利用 SpringBoot ES 实现类似连表查询?

一、摘要 在上篇文章,我们详细介绍了如何在 ES 精准实现嵌套json对象查询? 那么问题来了,我们如何在后端通过技术方式快速实现 es 内嵌对象数据查询呢?...为了方便更容易掌握技术,本文主要以上篇文章中介绍通过商品找订单为案例,利用 SpringBoot 整合 ES 实现这个业务需求,向大家介绍具体技术实践方案,存入esjson数据结构如下: {...二、项目实践 2.1、添加依赖 SpringBoot项目中,添加rest-high-level-client客户端,方便与 ES 服务器连接通信,在这里需要注意一下,推荐客户端版本与 ES 服务器版本号一致...application.properties配置文件,定义 es 配置连接地址 # 设置es参数 elasticsearch.scheme=http elasticsearch.address=127.0.0.1...SpringBoot 整合 es 实现数据高效搜索,内容如果难免有些遗漏,欢迎网友指出!

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单细胞测序基础知识

有限稀释技术(Limiting dilution technique)是利用管稀释分离细胞,这种方法主要缺点是效率低下,成功率20%左右。...流式细胞分选(FACS)广泛用于分离单个细胞,悬浮状态下需要较大起始体积(>10,000个细胞)。 激光捕获显微分离(LCM)是利用计算机辅助激光系统将单个细胞从固体组织中分离出来。...微孔microwell 优势是可以与荧光触发细胞分离技术(FACS)结合,实现基于表面标记细胞选择。...微技术 是将单个细胞包裹在µl级别的被搭载到建库所用酶上,每个微包含一个独特条码(barcode),由那个被包装好细胞产生所有reads都被贴上了该条码,也是为了之后对于不同细胞...一般微技术通量最大,查资料得知一秒能包装7万个以上,并且建库费用合适--0.05美元/细胞。但是高额测序费用又成了他短板,鉴定出一般只有一千多个差异转录本,覆盖度还是比较低 ?

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友谊小船说翻就翻?Nature新研究,水可以浮在船上!

从那时起,科学家们就利用振动使液体半空中悬浮起来,使气泡下沉而不是上升,而沉淀下来重粒子通常会漂浮到表面上。但这项新研究表明,浮力定律似乎被「颠覆」了。...科学家们是研究振动对液体行为影响时发现这一现象封闭容器,一层液体可以漂浮在空气,原因可能是振动能够稳定那些本来不稳定系统。...给液体一个合适频率垂直振动,就能阻止形成。没有,液体就能继续悬浮在空中: 它不是下落,而是停留在空气垫上。...研究小组从来没有使用过超过半升液体,但他们也说了,唯一限制体积是摇晃机器强度。 尽管这种方法对粘性液体很有效,但对水就不那么有效了。所以,你如果想在海洋上颠倒航行,是不会实现。...当质量过大时,平衡就会遭到破坏 ,悬浮液体就会跌落。 这不只是一个「魔术」,研究人员表示这个发现有实际意义,比如选矿过程从水和其他液体中分离废物。

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腾讯云容器服务 TKE 利用 HPA 实现业务弹性伸缩

资源利用指标决定控制器行为, 控制器会周期性根据 Pod 资源利用情况调整服务 Pod 副本数量,以使得工作负载度量水平与用户所设定目标值匹配。...测试 Pod 执行模拟请求命令后,通过观察下图中工作负载 Pod 数量监控可以看到, 16:21 分时工作负载扩容副本数量至 2 个,由此可推断出已经触发了 HPA 扩容事件。...总结 本示例主要演示了 TKE HPA 功能, 使用 TKE 自定义网络出口带宽度量类型作为工作负载 HPA 扩缩容度量指标,当工作负载实际度量值超过 HPA 配置度量目标值时, HPA...根据扩容算法计算出合适副本数实现水平扩容,保证工作负载度量指标满足预期,保障工作负载健康稳定运行;当实际度量值远低于 HPA 配置度量目标值时,HPA 会在容忍时间后计算合适副本数实现水平缩容,...适当释放闲置资源,达到提升资源利用目的,并且整个过程 HPA 和工作负载事件列表都会有相应事件记录,使整个工作负载水平扩缩容全程可追溯。

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单细胞+外泌体||10X单细胞RNA测序研究单个细胞单个EVs转录组学特征

今天介绍这篇文章巧妙地利用10X Genomoics单细胞技术单个囊泡水平研究其转录组学特征和异质性。...单个囊泡大小100nm-1000nm级别,这个大小是比常规单个细胞要小非常多,打个比方:一个细胞体积约等于10^6个外泌体 思考:那10x genomics技术在这里形成油包水结构时候,双包体...图b、c:囊泡与空区分,常规细胞与空之间会有一个拐点;在这里囊泡数据可以看到观察不到拐点 重点Note:外泌体bulk数据RNA含量是非常低,那单个囊泡就更低了,文章是如何处理这个空呢...可以看原文细节~ 去除空之后,得到三个样本数据:K562-EV1, 562-EV2, and MSC-EV,每个样本分别得到了2366, 4684, and 1680个囊泡。...看完后,文章中有许多地方对外泌体bulk细胞转录组内容物与单个EV转录组内容物比较:EVs包含进来RNA分子表达分布,种类上看,与细胞好像没啥区别啊!

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全程剖析Western blot原理,你才能掌控它

WB采用抗体作为探针,抗体可以与附着固相支持物靶蛋白抗原表位发生抗原-抗体免疫反应。...同时,裂解还包含其它成分,如Tris-Hcl作为缓冲剂,可防止蛋白提取过程变性;以及Nacl,可防止提取蛋白由于非特异性聚集而形成聚体等。...购买商用蛋白标准品(即包含已知浓度蛋白溶液),一般有25μg/μl、5μg/μl、4μg/μl三种。首先,按照(铜离子体积:BCA regent体积=1:50)配制BCA工作。...测定完浓度蛋白根据体积比例加入5X或者1X蛋白上样缓冲,96℃以上水浴10min,使蛋白充分变性,解除二级或三级结构,只保留一级链式结构。...目前较多采用是ECL化学发光法,ECL工作包括鲁米诺(是的,就是我们看刑侦节目时案发现场看血迹东西)和过氧化物,二者避光保存,现配现用(1:1配制),用时膜上就行,目标条带将在黑暗环境下发出荧光

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单细胞测序原理

BD 技术不再采用利用 DROP-seq 微技术进行单细胞分离和捕获,转而采用 Cyto-seqa特有的蜂窝板技术。...将制备好细胞悬浮利用微流控芯片,将带有细胞标签序列(cell Barcode)凝胶珠(bead)和细胞包裹在。...,细胞破裂,释放 mRNA 与凝胶珠上细胞标签序列相连,形成单细胞 GEMs 结构(Gel Bead in Emulsions)。...细胞 mRNA 中进行逆转录反应形成 cDNA,随后破乳,进行 cDNA 文库构建。通过文库序列上细胞标签序列可以区分目标序列来自于哪一个细胞。 文库构建主要分为 5 个步骤。...,通过 barcode 磁珠-单细胞-油对应关系形成 GEM(Gel Beads-in-emulsion),实现真正意义上单细胞测序。

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照片居然可以存储氨基酸分子溶液里

他们想法是利用混合物特定代谢物存在或不存在作为二进制1和0来编码数字信息。 图1 该方法将数字数据1和0映射到溶液特定分子存在或不存在。研究人员使用该方案对图像文件进行了编码。...他们总共制作了1024个,每个6种代谢物或缺失或存在,提供了足够二进制信息来编码6142像素图像。 然后,金属板被烘干,留下微小代谢物分子点,每个点都保存着数字信息。...仪器标称体积为2.5nL,但为了降低体积变化对结果影响,通常每种化合物使用2(5nL)。以标准2.25mm点距排布,共计1536个位置(32×48)。...利用逻辑回归对多峰数据进行解码 假设鉴别峰值是部分不相关(如图D所示),利用每个代谢组多个m/z峰来寻求改进是合理。这样策略将在更复杂代谢组变得越来越重要。...图4和图5数据累积读取错误率显示为逻辑回归中使用质量数函数。 将这些技术应用于早期ibex数据集,可以实现<0.5%错误率。但是,重复测量斑点会导致数据丢失。

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一文读懂相分离(图文详解)

生活可以见到水上漂浮,就是一种相分离现象。一共两种相,即水和油,由于都是液体,也叫相分离(LLPS,liquid-liquid phase separation)。...最为神秘就是无膜细胞器,无膜细胞器一些研究也叫(liquid droplet)或者是液态凝聚体(liquid condensates)。...导师 Hyman 给他们布置课题是观察线虫卵RNA和P颗粒形成。 实验,他们观察到 P 颗粒类似于游走在细胞质内,会互相碰撞,融合。...重要是,他们通过生化手段实现体外重现体内相分离现象,从而降低了大家相分离实验难度。...体外实验,FUS 朊病毒样蛋白会与其他分子形成小,并逐步增加粘稠度,最终形成固相,导致病变。

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读《结节状病灶细胞生态学单细胞视角》

利用这种改进单细胞技术,构建了一个多种炎症性皮肤状况细胞图谱,包括痤疮、脱发、环形肉芽肿、麻风病和牛皮癣。 在这里,我们不禁要问:为啥选用基于微孔法开发而非法呢?...作者文中,给出了解释: 首先,基于单细胞技术,细胞进入微流控体系是串联(一个接一个)而不是平行,导致进入分离体系第一个细胞和最后一个细胞之间表型或转录变化。...此外,许多微流控方法,样品必须使用单独微流控通道进行顺序处理,这可能导致长时间实验和随着时间推移样品活力损失。...涉及肉芽肿实验,时间是一个特别重要变量,因为细胞活力和组织坏死基线时就已经存在了。 其次,微流控系统中使用十分温和裂解条件,以保持反乳化完整性。...作者开发Seq-Well Pipeline如下: 与需要大量设备微流控系统不同,微孔法磁珠和细胞加载是通过重力实现,只需要使用移管和标准实验室设备即可进行高大上单细胞实验。

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亡蛛复活!「死灵机器人」竟抓走了同类

论文地址:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202201174 这究竟是如何实现呢?...首先,胶水被注射到针头一侧,附着在上面,使针头表面的能量最小化。 第二,胶水沿着针头向下移动,重力作用下接触到蜘蛛角质层(或者叫外骨骼)表面。...最后,当接触完毕时,胶水会沿着针头和蜘蛛角质层接面形成半月形状一滩。最终,胶水固化后就会形成气密性密封。 如下图所示, 插入针头到胶水整个过程,可以大约10分钟内完成。...然后他们用一染成了蓝色胶水滴纸上,成功复现了气密性密封。 这样做是为了证明,胶水滴蜘蛛外骨骼和针接面上并扩散,确实能达到动态能量最小化。...另外一个应用便是,让死灵蜘蛛机器人去捕捉自然界较小昆虫,利用其本体就是天然伪装高手。 而且,蜘蛛本身就易于生物降解,因此研究过程,并不会产生大规模废物流。

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