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使用limma进行两差异分析

limma这个R包可以用于分析芯片数据,也可以分析NGS测序数据,其核心是通过线性模型去估算不同分组中基因表达量均值和方差,从而进行差异分析。...limma也是基于raw count定量方式,但是它并不提供归一化算法。在官方手册中,推荐采用edgeRTMM归一化算法。完整代码如下 1....表达量转换 在进行差异分析前,需要对表达量进行转换,有以下两种选择 logCPM voom 第一种转换就是计算logCPM值,第二种转换适用于样本间sizaFactors差异较大情况。...差异分析 转换之后表达量就可以进行差异分析了,代码如下 fit <- lmFit(logCPM, design) fit <- eBayes(fit, trend=TRUE) res<- topTable...这里只是介绍了最简单用法,更多复杂案例,比如多个分组,时间序列差异分析等,请参考官方文档。 ·end· —如果喜欢,快分享给你朋友们吧—

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使用DESeq2进行两差异分析

DESeq2 接受raw count定量表格,然后根据样本分组进行差异分析,具体步骤如下 1....通常是过滤低表达量基因,这一步是可选,阈值可以自己定义;另外一个就是指定哪一作为control,在计算log2FD时 ,需要明确control,默认会字符串顺序对分组名字进行排序,排在前面的作为...control,这种默认行为选出control可能与我们实验设计不同,所以必须明确指定control。...估计基因离散程度 DESeq2假定基因表达量符合负二项分布,有两个关键参数,总体均值和离散程度α值, 如下图所示 ? 这个α值衡量是均值和方差之间关系,表达式如下 ?...,已经考虑到了样本之间已有的差异,所以可以发现,最终结果里log2FD值和我们拿归一化之后表达量计算出来不同, 示意如下 > head(results(dds)[, 1:2]) log2 fold

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R入门?从Tidyverse学起!

tidyverse就是他将自己所写包整理成了一整套数据处理方法,包括ggplot2,dplyr,tidyr,readr,purrr,tibble,stringr, forcats。...(data.frame升级款) stringr, for strings. (处理字符,查找、替换等) forcats, for factors....数据操作速度会更快 如下图,直接查看tibble格式数据,可以一目了然看清数据大小和每列格式 ? 有两种方式来创建tibble格式数据 1. 直接创建 ? 2....dplyrdplyr基本包含了我们整理数据所有功能,堪比瑞士军刀,这里介绍以下函数: filter: filters out rows according to some conditions (...5. summarise & group_by group_by通常与summarise搭配使用,如果我们需要对不同species数据计算均值,那么利用group_by指定需要分组列,summarise

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使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应

昨天讨论:TCGA等大样本量差异分析该使用DEseq2还是edgeR呢? 让大家印象深刻,也有不少留言问到如果转录测序数据集有批次效应该怎么办。...所以我打个补丁给大家,其实使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应。...,跟芯片有一点点不同,它其实都不需要改变表达量矩阵本身,仅仅是使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应即可。...个样品,是按照处理和对照组分开,泾渭分明; 按照处理和对照组分开 人为引入批次 但是我们这个教程是为了讲解使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应,所以需要人为引入批次...,可以在使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应,得到差异基因仍然是有效果

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学习R包

eg:安装来自cranstringr包:install.packages("stringr")安装来自Biocductorlimma包:BiocManager::install("limma")加载...使用一个R包:先安装,再加载,最后使用实操代码(依旧以dplyr为例)options("repos"=c(CRAN="http://mirrors.tuna.tsinghua.edu.cn/CRAN/"...dplyr包有很多函数,为了防止dplyr包中函数名与其他函数产生冲突,使用时前面加上“包名::”dplyr五个基础函数mutate(),新增列select(),按列筛选按列号筛选注意筛选内容与表格内容统一...Sepal.Length平均值和标准差group_by(test, Species)summarise(group_by(test, Species),mean(Sepal.Length), sd(Sepal.Length...))dplyr两个实用技能管道操作 %>% (cmd/ctr + shift + M)同时执行三件事(加载任意一个tidyverse包即可用管道符号)count统计某列unique值dplyr处理关系数据即将

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手把手教你R语言方差分析ANOVA

欢迎大家关注全网生信学习者系列:WX公zhong号:生信学习者Xiao hong书:生信学习者知hu:生信学习者CDSN:生信学习者2介绍方差分析(ANOVA)是一种统计方法,用于比较两或多组数据之间均值差异...然后,你可以使用head(), tail(), summary(), str()等函数来查看数据结构和内容。...()等函数)或进行变量选择(使用子集选择或dplyrselect()函数)。...F值越大,自变量引起变化越有可能是真实,而不是偶然; Pr(>F)列是F统计量p值。这表明,如果均值之间没有差异原假设成立,那么从检验中计算出F值发生概率大小。...= 77)t.test(RR ~ D, data = data_ttest)step6: 后置检验ANOVA结果仅仅揭示多个差异结果,具体到哪两个内部差异还需要做后置检验后置检验通常采用TukeyHD

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数据分析:假设检验方法汇总及R代码实现

查找t分布临界值:根据自由度(通常是 −1)和显著性水平,查找t分布表中临界值。做出结论:如果计算出t统计量大于临界值,则拒绝零假设,认为两数据之间存在显著差异。...值,当p值小于0.05时,我们有足够证据拒绝零假设,即认为相应之间不存在差异。...值,当p值小于0.05时,我们有足够证据拒绝零假设,即认为相应之间不存在差异。...当比较三或更多组数据时,如果数据满足正态分布和方差齐性假设,我们可以使用ANOVA(方差分析)来评估差异。...对于三数据初步检验,如果结果显示间存在显著差异,我们通常需要进行后置检验来解析具体差异。后置检验可以帮助我们识别哪些特定之间差异是统计学上显著,从而提供更深入分析结果。

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R语言ggplot2画图比较两连续型数据几种方案

连续型数据分组比较在科研生活中非常常见,比如:实验和对照基因表达量比较、临床病人存活和死亡某项检查指标的比较 等等。检验两连续型数据之间是否存在差异通常会使用T检验。...对数据进行展示通常可以使用柱形图,箱线图,小提琴图,直方图,散点图等几种方式。今天推文分别介绍一下以上5种图形ggplot2实现代码。...以下代码用到3个R语言包 分别是ggplot2 用来画图RColorBrewer 用来生成颜色dplyr 用来整理数据 ggplot2和dplyr如果是第一次使用需要安装,安装用到命令是 install.packages...模拟是临床病人存活者和死亡者C反应蛋白(CRP)差异。 ?...image.png 接下来我们就来看看分别可以用哪些图来展示这样数据 带误差线柱形图 首先是对数据集进行转换 library(dplyr) df1<-summarise(group_by(data,

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单细胞各个亚群特异性高表达基因数据库注释(包括GO,KEGG,ReactomePA)

,详见:2个分组单细胞项目标准分析,这样的话不同样品也可以有表型分组,比如处理和对照。...去除细胞效应和基因效应 06.单细胞转录数据降维聚类分群 07.单细胞转录数据处理之细胞亚群注释 08.把拿到亚群进行更细致分群 09.单细胞转录数据处理之细胞亚群比例比较 找各个单细胞亚群特异性高表达量基因...) 会得到热图,展现每个单细胞亚群特异性高表达量基因前3个,它其实就是一种差异分析了,这个时候它对比是每个单细胞亚群和所有的其它细胞。...如果是使用COSG包cosg函数,是另外格式输出各个单细胞亚群top基因: input_sce = sce table(Idents(input_sce)) pro = 'cosg_seurat_clusters...kegg数据库注释 然后是ReactomePA数据库注释结果,也是很合理啦: ReactomePA数据库 后面还有GO数据库CC,BP,MF图,我就不一一展示了,因为这个PBMC非常出名

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肝癌患者 snRNA-seq 和 scRNA-seq 测序数据是否有区别?

Seurat 也被用来处理数据 并比较两个测序之间差异识别不同细胞类型方法。在目前研究中, 14,349 个单核和 9,504 个单细胞转录 从上述HCC组织中获得。...值得注意是,使用 snRNA ‑seq 检测到大量肝细胞,在scRNA‑seq 检测到增加免疫细胞。 本研究结果提供了一个 以单细胞分辨率显示人类 HCC 综合图像。...结合使用两种测序方法 可能有助于细胞间相互作用研究。...参考:单细胞核转录测序 - 简书 (jianshu.com) 虽然snRNA-seq能够获得更加全面完整细胞类型,但是对于某些细胞类型获得比例不如scRNA-seq,主要表现为免疫细胞。...gather & spread library(reshape2) # 使用函数 melt & dcast library(dplyr) library(ggplot2) tb=table(phe$

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「R」数据操作(四):初学者学习tidyverse

资料来源:DataCamp tidyverse是一处理与可视化R包集合(人称“极乐净土”,但我并不喜欢这个称呼),其中ggplot2与dplyr最广为人知。...核心包有以下一些: ggplot2 - 可视化数据 dplyr - 数据操作语法,可以用它解决大部分数据处理问题 tidyr - 清理数据 readr - 读入表格数据 purrr - 提供一个完整一致工具集增强...R函数编程 tibble - 新一代数据框 stringr - 提供函数集用来处理字符数据 forcats - 提供有用工具用来处理因子问题 有几个包没接触过,R包太多了,这些强力包还是有必要接触和学习下使用...::filter() ## x dplyr::lag() masks stats::lag() 有用函数 # tidyverse与其他包冲突 tidyverse_conflicts() #...setosa ## [到达getOption("max.print") -- 略过110行]] iris %>% mutate(SLMn = Sepal.Length * 10) # 创建一列

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单细胞转录 | 细胞亚群人工注释

scRNA <- load("scdata2.Rdata") 数据获取请查看:单细胞转录 | 多样本处理与Harmony整合 5....only.pos = TRUE, logfc.threshold = 0.25) 输出文件: p_val:P值; avg_log2FC:平均差异倍数...()) %>% dplyr::filter(p_val<0.05) # 将avg_log2FC排名前10基因筛选出来 top10 = all.markers %>% group_by(cluster)...%>% top_n(n = 10, wt = avg_log2FC) 输出文件: 5.3 手动查找maker基因进行注释 我们可以通过下面的数据库进行查找maker基因进行细胞注释。...maker基因; ② 查看结果 这里数据库匹配是"Stem cell",实际情况下每个cluster需要多搜索几个基因再确定细胞类型,这在里因为我比较懒,所以仅以"IBSP"基因为例,展示网站使用方法

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「R」dplyr 行式计算

这篇文章,我们将学习围绕rowwise() 创建 row-wise 数据框 dplyr 操作方法。 本文将讨论 3 种常见使用案例: 按行聚合(例如,计算 x, y, z 均值)。...It doesn’t have to be you. — Jenny Bryan❞ 载入包 library(dplyr, warn.conflicts = FALSE) 创建 行式操作需要一个特殊分组类型...,我们县创建一个行式数据框: rf % rowwise(id) 我们然后使用 mutate() 添加一个新列,或者使用 summarise() 仅返回一个汇总列: rf %>% mutate...这不是你通常需要考虑事情(它会工作),但知道什么时候出错是很有用。 分组数据框(每个恰好有一行)和行数据框(每个总是有一行)之间有一个重要区别。...mutate() 将列切分然后传入 length(y) 时候,分组 mutate 使用 [ 操作,而行式 mutate 使用 [[。

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