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3C的衍生技术简介

4C在junction reads基础上,进行二次酶切,形成包含junction reads的环状序列,然后针对感兴趣的基因组区域,设计PCR引物,将包含该基因组区域的环状片段扩增出来,从而可以研究该基因组片段与其他片段的相互作用关系...5C采用事先设计好的,两端带有通用引物的探针与junction reads杂交,进行PCR扩增,PCR产物两端包含了通用引物,下游可以结合芯片或者高通量测序来分析基因组区域的互作。...3C,4C,5C都是基于最原始的junction reads, 不同之处就在于不同引物设计策略导致的通量的差异。...Hi-C在原始3C基础上有所变化,junction reads产生过程中添加生物素标记,然后采用抗体富集带有标记的junction reads, 再构建普通的测序文库,进行高通量测序。

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使用CIRI识别环状RNA

对于输入的sam文件,需要经过两次扫描,在第一次扫描时,根据双端数据的比对情况筛选候选的环状RNA,这一步通过判断SAM文件中CIGAR那一列的值来实现,本质上是检测覆盖环状RNA连接点处的junction...图A表示junction read只覆盖了起始外显子和终止外显子的部分序列,这两部分reads在基因组上的比对位置是相反的,绝大部分的环状RNA都符合这种模型。...图B表示junction read除了覆盖了起始外显子和终止外显子的两部分序列外,还覆盖了中间的一个外显子的部分序列,这种情况下reads可以分成3个部分比对到基因组上。...图C表示junction read除了覆盖了整个环状RNA外,还重复又读了一部分序列,这个只有当环状RNA的序列长度小于测序读长时才可能出现。...在后续验证时,可以挑选表达量较高的来验证,在软件对应的文章中,挑选了junction reads数大于5的环状RNA来进行验证。

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使用CIRCexplorer2识别环状RNA

在v1版本中只支持tophat-fusion和STAR两款软件进行序列比对来识别junction reads,在v2版本中,扩展到了以下5种软件 Tophat-Fusion STAR BWA MapSplice...软件的使用过程就显得简单多了,该软件分为以下5个功能模块 Align Parse Annotate Assemble Denovo Align用于将序列比对到参考基因组上;Parse用于从比对结果中挑选junction...2. parse parse用于解析序列比对的结果,支持多款软件,以常用的STAR为例,代码如下 CIRCexplorer2 parse \ -t STAR \ Chimeric.out.junction...\ > CIRCexplorer2_parse.log 对于其他软件的用法,具体请参考官方文档,无论是什么比对软件,该命令最终都会生成以下文件 back_spliced_junction.bed 3...ref hg19_ref.txt 预测环状RNA的代码如下 CIRCexplorer2 annotate \ -r hg19_ref.txt \ -g hg19.fa \ -b back_spliced_junction.bed

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Windows 中的硬链接、软链接、符号链接、快捷方式

Windows支持 4 种 ”链接” 机制,分别是shortcut(快捷方式)、hard link(硬链接)、junction point(软链接)、symbolic link(符号链接)。...\Demo.txt junction point/softlink/reparsepoint junction point/softlink/reparsepoint 中文名 交接点 / 软链接 /...即使创建junction point时使用了相对路径,保存到NTFS中时将隐式转换成绝对路径。...使用限制 junction point必须与target directory位于同一local computer,可以简单理解成不能跨主机, 在local computer范围内,可以跨盘符。...关联 删除target directory,junction point仍将存在,但失效了,变得不可用。这个很好理解,因为此时junction point指向不存在的目录。

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比较 Windows 上四种不同的文件(夹)链接方式(NTFS 的硬链接、目录联接、符号链接,和大家熟知的快捷方式)

mklink 使用 mklink 命令,你可以创建“硬链接(Hard Link)”、“目录联接(Junction Point)”和“符号链接(Symbolic Link)”。...有关使用 .NET/C# 来创建目录联接的方法,可以阅读我的另一篇博客: .NET 实现 NTFS 文件系统的硬链接 mklink /J(Junction) - walterlv 快捷方式 快捷方式是一个单纯...硬链接(Hard Link) 目录联接(Junction Point) 符号链接(Symbolic Link) 命令 mklink /H Link Target mklink /J Link Target...额外的坑 如果你在开始菜单里面有快捷方式指向了一个目录联接(Junction Point)中的文件,那么在 Windows 10 操作系统更新后这个快捷方式便会消失。...包输出目录来快速调试公共组件代码 - walterlv 参考资料 NTFS reparse point - Wikipedia windows - What is the difference between NTFS Junction

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还是用RSeQC对比对后的转录组数据做一下质控

geneBody_coverage.py geneBody_coverage2.py infer_experiment.py inner_distance.py insertion_profile.py junction_annotation.py...junction_saturation.py mismatchprofile.pynormalizebigwig.pyoverlay_bigwig.py read_distribution.py read_duplication.py...用 来计算RNA-seq 在基因上的覆盖度,这里推荐对所有的样本的 文件一起运行该程序进行诊断,如图: junction_annotation.py: 输入一个 或 文件和一个 格式的参考基因文件,这个模块将根据参考基因模型计算剪切融合...(splice junctions)事件. splice read: 一个RNA read,能够被剪切一次或多次 splice junction:多个跨越同一个内含子的剪切事件能够合并为一个 ....一般来说,novel的junction区域总是有的,因为我们用的是ucsc的refseq参考注释集,本身就是不够完整的。

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