RT-qPCR实验流程与结果判读 | MCE原创

今天就让蒙CC带您一起了解RTQPCR的实验过程及结果判读吧。RTQPCR是以m mrna为模板，在逆转路酶的作用下合成cdna，之后再进行PCR的过程。传统PCR主要用于定性检测来判断目的基因是否存在QPCR，在此基础上可实现实时定量分析。然而，RTQPCR则将逆转录与实时定量PCR结合，可对RNA进行定量测定。RTQPCR可以避免RNA不稳定造成的干扰，以及基因组DNA和内涵子的干扰。RTQPCR主要应用于基因表达分析。在簿检测、医学诊断等很多方面都有重要的应用。实验流程可以分为RNA的逆转录、QPCR扩增检测和实验分析三个主要步骤。

首先是准备样本和提取RNARNA提取后要检测RNA的质量和完整性，两者是实验成功的前提。CDNA的制备可以选择试剂盒来进行，针对具体的实验样本选择对应的试剂盒，进而获得高质量CDNA。上机检测一般采用sybr green法进行，可以选择市面上已有的试剂盒，再根据仪器型号和试剂设定程序进行PCR检测。参考一切的型号和说明书，选择对应校正染料进行校正。以sir RNA敲低对应样本的m mrna水平为例，设计实验每个样本建议至少3~4个副孔。结果判读首先是观察CT值，达到理想范围的CT值才更能准确反映数据的真实情况，进行后续分析。溶解曲线是评判RTQPCR数据可信度的核心标准，若未呈现单峰，则数据不具备可靠性。

扩增曲线也是反馈结果有效性的标准。数据处理一般采用相对定量，用于比较不同样品中基因表达量的相对变化。如需RTQPCR相关产品，可进入MC官网浏览挑选，一站式满足您的科研需求。以上就是今天的全部内容了，感兴趣的小伙伴可以关注我们，更多专业知识和精彩活动等着您哦，记得点赞关注哦。