背景介绍
皮肤覆盖全身表面,是人体最大的器官之一,可分为表皮与真皮两层,并借皮下组织与深层组织连接。表皮位于皮肤浅层,由角化的复层扁平上皮组成。细胞主要分为两类:一类是角质形成细胞,约占表皮细胞的80%以上,且分层排列;另一类细胞为非角质形成细胞,数量较少,散在分布于角质形成细胞之间。真皮位于表皮下,主要由致密结缔组织组成,有许多弹力纤维和胶原纤维,故有弹性和韧性。真皮是皮肤内发生免疫反应的主要部位,参与免疫反应的细胞包括树突状细胞、T细胞、内皮细胞、肥大细胞、成纤维细胞等。
在皮肤中细胞之间的连接主要通过桥粒与半桥粒连接,富含胶原纤维和弹性蛋白。因此在皮肤组织的解离过程中我们选择使用DispaseⅡ和胶原酶Ⅳ。DispaseⅡ为中性的蛋白酶,可水解纤连蛋白和IV型胶原蛋白,具有切割亮氨酸-苯丙氨酸键的特异性;该酶非常温和,不会对细胞膜造成损伤。
皮肤组织
皮肤组织示意图
注意:皮肤细胞悬液制备中容易出现结团率偏高的情况。我们可以通过DNAseI和其他类型胶原酶辅助解离降低结团率,或者通过结团细胞团和单个细胞间沉降系数差进行离心沉降,从而获取低结团的细胞悬液。再者需要保证足够的解离时间,解离时间较短或者机械辅助不足时获取的角质层细胞比例较高。