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使用limma进行两差异分析

limma这个R包可以用于分析芯片数据,也可以分析NGS测序数据,其核心是通过线性模型去估算不同分组中基因表达量均值和方差,从而进行差异分析。...limma也是基于raw count定量方式,但是它并不提供归一化算法。在官方手册中,推荐采用edgeRTMM归一化算法。完整代码如下 1....表达量转换 在进行差异分析前,需要对表达量进行转换,有以下两种选择 logCPM voom 第一种转换就是计算logCPM值,第二种转换适用于样本间sizaFactors差异较大情况。...差异分析 转换之后表达量就可以进行差异分析了,代码如下 fit <- lmFit(logCPM, design) fit <- eBayes(fit, trend=TRUE) res<- topTable...这里只是介绍了最简单用法,更多复杂案例,比如多个分组,时间序列差异分析等,请参考官方文档。 ·end· —如果喜欢,快分享给你朋友们吧—

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使用DESeq2进行两差异分析

DESeq2 接受raw count定量表格,然后根据样本分组进行差异分析,具体步骤如下 1....通常是过滤低表达量基因,这一步是可选,阈值可以自己定义;另外一个就是指定哪一作为control,在计算log2FD时 ,需要明确control,默认会字符串顺序对分组名字进行排序,排在前面的作为...control,这种默认行为选出control可能与我们实验设计不同,所以必须明确指定control。...log2FD 反映是不同分组间表达量差异,这个差异由两部分构成,一种是样本间本身差异,比如生物学重复样本间基因表达量就有一定程度差异,另外一部分就是我们真正感兴趣,由于分组不同或者实验条件不同造成差异...用归一化之后数值直接计算出log2FD包含了以上两种差异,而我们真正感兴趣只有分组不同造成差异,DESeq2在差异分析过程中已经考虑到了样本本身差异,其最终提供log2FD只包含了分组间差异

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dplyr强大分组汇总

在现实生活中我们经常会遇到非常多需要分组汇总情况,单个汇总价值不大,只有分组之后,才能看出差异,才能表现出数据价值。...dplyr为我们提供了group_by()函数,主要使用group_by()对数据进行分组,然后再进行各种计算,通过和其他操作进行连接,发挥更加强大作用。...group_by() 查看分组信息 增加或改变用于聚合变量 移除聚合变量 联合使用 summarise() `select()`/`rename()`/`relocate()` arrange()...查看分组信息 group_keys()查看用于分组内有哪些类别,可以看到species有38种: by_species %>% group_keys() ## # A tibble: 38 x 1...下面这部分主要介绍group_by和其他函数联合使用: summarise() by_species %>% summarise( n = n(), height = mean(

1.7K30

比较微生物差异分析方法

在微生物研究中我们常常需要根据某些感兴趣表型来找到与其相关特征(比如菌群、OTU、基因家族等等)。...但微生物数据结构导致了这必然是一项相当艰巨任务,因为他们: •高维特征集(通常超过 100 到 10,000 个特征);•高度稀疏(许多特征仅在少数样本中被发现);•特征间复杂相关性结构;•计数组成性...虽然这并不完美,但至少会证明一些结果鲁棒性,增加我们对结果信心。 下面我将基于一个用 MetaPhlAn2 注释公共宏基因数据,使用五种不同算法进行差异分析。...DESeq2 DESeq2 将对原始计数进行建模,使用标准化因子(scale factor)来解释库深度差异。然后估计每条 OTU 离散度,并缩小这些估计值以生成更准确离散度估计。...ANCOM-BC ANCOM-BC 引入了一种包含偏差校正微生物组组成分析方法,该方法可以估计未知抽样比例,并校正由样品之间差异引起偏差,绝对丰度数据使用线性回归框架建模。

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奇怪转录差异表达矩阵之实验分组

GSE126548-分组差异并不大 使用RNA-Seq分析肺癌患者原发肿瘤中基因表达差异,比较了有脑转移和没有脑转移患者,以寻找不同表达基因和潜在信号通路 Data processing:...dds2 <- DESeq(dds) #4 提取差异分析结果,trt对untrt差异分析结果 tmp <- results(dds2,contrast=c("group_list","withBM...接着,尝试挖掘潜在真正影响因素 在之前两篇推文中我们介绍了如何通过PCA逐步寻找真正影响差异表达因素 使用TPM/FPKM/RPKM进行差异分析真的可以消除系统误差吗?...dds2 <- DESeq(dds) #4 提取差异分析结果,trt对untrt差异分析结果 tmp <- results(dds2,contrast=c("group_list","withBM...,并没有自己作原发对照,也可能是这个原因,数据集作者并没有发表相关文献 根据数据集描述信息和数据集被使用信息,我们在一篇被撤回文章中找到了该数据集使用来自TCGA对照样本 RETRACTED

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dplyracross操作

dplyracross函数取代了之前xx_if/xx_at/xx_all,用法更加灵活,初学时觉得不如xx_if/xx_at/xx_all简单易懂,用习惯后真是利器!...主要是介绍across函数用法,这是dplyr1.0才出来一个函数,大大简化了代码 可用于对多列做同一个操作。...一般用法 陷阱 across其他连用 和filter()连用 一般用法 library(dplyr, warn.conflicts = FALSE) across()有两个基本参数: .cols:选择你想操作列....fn:你想进行操作,可以使一个函数或者多个函数组成列表 可以替代_if(),at_(),all_() starwars %>% summarise(across(where(is.character...where(is.numeric),因为第2个across会使用新创建列(“min_height”, “min_mass” and “min_birth_year”)。

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学员转录实战笔记之胰腺癌差异

文章描述转录测序数据生物信息学处理方法非常陈旧了: 生物信息学处理方法非常陈旧 我们一般来说不会再使用这样软件和流程,而且作者主要可视化其数据分析结果也很诡异: 数据分析结果也很诡异...但是文章仅仅是拿3个例子说明了,肿瘤样品和肿瘤样品相关性,正常样品和正常样品相关性,都是很高,而且肿瘤和正常相关性很低,这样就是为了说明正常组织和肿瘤组织两个分组差异是大于它们各自内部差异...主要是下载fa格式 抽空基因文件,以及配套gtf格式基因注释文件,如下所示: # 下载基因序列 nohup wget -c http://ftp.ensembl.org/pub/release...所以后面的差异分析也很奇葩,如果我们是仅仅是使用默认参数,就会导致根本就没有差异基因(统计学显著),如下所示: 根本就没有差异基因 这个时候有两个可能性,首先是我们样品处理阶段,有一些病人取样时候癌症和癌旁组织可能会混淆...,所以需要删除一些样品,6 vs 6 其实是很多可以操作空间,比如每个内删除2个样品,这样就是4 vs 4 组合进行差异分析。

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Python转录学分析框架:Omicverse安装以及差异分析

最初名字是Pyomic,但我们希望涵盖整个转录领域,因此将其改名为OmicVerse,旨在解决RNA-seq中所有任务。...也可以使用类似edgeR,Deseq2等包模型来计算p值。在这里,我们用一个从RNA-seq上游定量包FeatureCounts生成表达矩阵来演示差异表达分析流程。...dds.normalize() print('... estimateSizeFactors and normalize success') 现在我们可以从表达矩阵中计算差异表达基因,在计算前我们需要输入实验和对照...在这里,我们指定 4-3和4-4为实验,1--1, 1--2为对照使用ttest进行差异表达分析计算。当然你也可以使用wilcox来计算。...), plot_genes_num=8,plot_genes_fontsize=12,) 差异表达火山图 如果我们想绘制特定基因箱线图,我们也可以使用 plot_boxplot

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🧐 Limma | 三个差异分析怎么分析做呢!?~

1写在前面 高考结束了,不知道各位考生考怎么样,这种时候总是几家欢喜几家忧,但这也是实现阶级流动最佳机会。...回想自己高考过去10几年了,不能说学了医后悔吧,只能说后悔至极,苦不堪言啊,收入还少可怜。 真的劝各位学子,尽可能避免这类专业,如果有机会的话去看看外面的世界吧,还是和我们以为差太多了。...最近在做多组差异分析,分享一下我code吧,因为是基于limma包,所以还是比较简单,请放心食用。...2用到包 rm(list = ls()) library(tidyverse) library(limma) library(GEOquery) 3示例数据 这里我们用之前从GEO数据库上down一个...boxplot(exprSet) 5获取分组数据 由于样本共有12个,我们认为进行一下分组吧,分成3个,每组4个样本。

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animate 动画滞后执行解决方案

jQuery动画: animate 容易出现连续触发、滞后反复执行现象; 针对 jQuery 中 slideUp、slideDown、animate 等动画运用时出现滞后反复执行等问题解决方法有如下...: 1、在触发元素上事件设置为延迟处理, 即可避免滞后反复执行问题(使用setTimeout) 2、在触发元素事件时预先停止所有的动画,再执行相应动画事件(使用stop)推荐这种。...//第二种方式 $(".container").stop();//停止当前动画,继续下一个动画 $(".container").stop(true);//清除元素所有动画 $(".container...").stop(false, true);//让当前动画直接到达末状态 ,继续下一个动画 $(".container").stop(true, true);//清除元素所有动画,让当前动画直接到达末状态

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R tips:使用!!来增加dplyr可操作性

dplyr包在数据变换方面非常好用,它有很多易用性体现:比如书写数据内变量名时不需要引号包裹,也不需要绝对引用,而这在多数baseR函数中都不是这样,比如: library(tidyverse)...这种易用性是有代价,假如想要对分析工作稍微增加一些编程属性时,就会发现dplyr异常情况,比如将分组变量赋值给一个变量,使用变量来进行分组: ### 分组变量group_var无法完成工作 group_var...辅助dplyr完成编程工作 上面的例子中,之所以group_var不起作用,是因为dplyr直接将group_var当做变量名,然后去mtcars中寻找名字叫做group_var列,这肯定是会报错。...为了可以让它执行,我们可以需要告诉dplyr,先对group_var求值,获得真正分组名:gear,使用gear进行后续操作,这个先求值操作可以通过!!运算符来完成。...也不局限于dplyr,它是R MetaProgram一部分 比如对于ggstatplot包而言,它是一个统计及绘图包,常规使用如下: ### 两种写法都可以 mtcars %>% ggstatsplot

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使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应

昨天讨论:TCGA等大样本量差异分析该使用DEseq2还是edgeR呢? 让大家印象深刻,也有不少留言问到如果转录测序数据集有批次效应该怎么办。...所以我打个补丁给大家,其实使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应。...,跟芯片有一点点不同,它其实都不需要改变表达量矩阵本身,仅仅是使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应即可。...个样品,是按照处理和对照组分开,泾渭分明; 按照处理和对照组分开 人为引入批次 但是我们这个教程是为了讲解使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应,所以需要人为引入批次...,可以在使用DEseq2做转录测序差异分析时候顺便去除批次效应,得到差异基因仍然是有效果

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