##摘要
诱导多能干细胞（iPSC）的培养稳定性与培养基、传代操作和细胞外基质共同相关。对于采用无饲养层培养的研究，重组人玻连蛋白Vitronectin能否支持细胞贴附、集落生长和多能性相关特征，需要结合蛋白质量指标与实际培养数据判断。本文以Qkine截短型重组人Vitronectin（Qk120）为例，介绍其组成、纯度、内毒素和蛋白回收率等信息，并分析5μg/mL包被、E8-like培养基条件下的iPSC形态观察及OCT4、NANOG、SOX2免疫荧光结果，说明这些证据能够支持哪些结论，以及将其用于长期培养、定向分化和类器官研究时仍需验证的内容。

**关键词：iPSC无饲养层培养、Vitronectin、重组人玻连蛋白、Qkine、Qk120、iPSC包被基质、细胞外基质、多能性标志物、OCT4、NANOG、SOX2**

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## 一、iPSC培养表现不稳定时，为什么需要同时检查包被基质

诱导多能干细胞在疾病建模、药物筛选、定向分化及再生医学相关研究中具有重要应用价值，但在日常培养中，细胞贴附不稳定、集落形态变化和重复性不足仍是需要关注的问题。遇到这些情况时，研究人员通常会先检查培养基和传代操作，而培养容器表面的细胞外基质同样是培养体系的重要组成部分。细胞能否在接种后形成适宜的贴附状态，以及随后能否持续扩增，需要放在培养基、基质和细胞初始状态共同构成的环境中理解，不能只根据某一种组分的名称判断培养结果。

玻连蛋白（Vitronectin，VTN）是一种天然存在于细胞外基质和血浆中的糖蛋白，可以通过与细胞表面整合素相互作用，参与细胞贴附、迁移和存活等过程。在iPSC及胚胎干细胞（ESC）培养中，Vitronectin常被用作无饲养层体系的包被基质，为细胞提供适宜的贴附环境，并配合培养基支持扩增与多能性相关特征的维持。这里的“无饲养层”并不意味着不再需要基质，而是需要用适当的培养组分共同支持细胞生长。

因此，选择Vitronectin时值得关注的并不只有“细胞是否贴上去”。蛋白本身的来源和组成是否明确，所用浓度及包被条件是否适合目标体系，培养后的细胞是否保持相应形态与标志物表达，都是判断其适用性的不同层面。将这些信息联系起来，才能更具体地解释一种包被材料在特定iPSC培养体系中的作用。

## 二、Qk120的产品组成和质量指标分别说明什么

Qkine Qk120是一款截短型重组人Vitronectin，采用大肠杆菌表达体系，在英国剑桥生产。根据产品资料，该蛋白为无动物源成分（AOF）、无载体蛋白、无蛋白标签的冻干产品，SDS-PAGE定量分析纯度＞98%，内毒素＜0.05 EU/μg protein，蛋白回收率＞95%。这些指标分别对应蛋白纯度、杂质控制和回收情况，不能将它们理解成同一个意义上的“培养成功率”，也不能用蛋白回收率代替细胞贴附率。

![Qkine截短型重组人Vitronectin Qk120产品图](https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12003223/4578aaae4e82797876f3b7182fd8cbfe.jpg)

**图1：Qkine重组人Vitronectin（Qk120）。产品图用于识别所讨论的包被蛋白。**

对于希望控制动物源成分引入、构建组成明确培养体系的研究，AOF、无载体蛋白和无蛋白标签具有直接的材料选择意义。不过，某一种基质蛋白符合AOF要求，并不能自动说明整个培养流程已经不含动物源成分，培养基、其他添加物及操作过程中使用的材料仍需分别核对。同样，较高纯度和较低内毒素为原料质量评价提供依据，但目标细胞在该基质上的实际表现仍需要培养实验确认。

Qk120提供500μg和5mg两种规格，原厂资料还说明可提供符合GMP要求的细胞治疗级产品。具体研究应核对所使用版本及其配套质量文件，不能把常规科研规格直接视为细胞治疗级材料。相关产品还包括牛Vitronectin（Qk121）、猪Vitronectin（Qk122）及Qk120预包被6孔板，这些信息便于识别不同物种来源和使用形式，但不能作为它们在同一细胞体系中能够直接互换的依据。

## 三、5μg/mL包被条件下的iPSC形态观察提供了什么证据

在本文所引的原厂实验中，Qkine使用5μg/mL Qk120包被培养板，并在E8-like培养基条件下观察iPSC生长。Day 2可见贴附细胞及初步形成的集落；Day 4集落较为明显，传代前汇合度约为85%；Day 7仍保持集落生长状态，传代前汇合度约为75%。这些观察为Qk120在该实验体系中支持iPSC贴附与后续培养提供了形态学参考，解读时应保留包被浓度、培养基背景及观察时间点。

![Qk120与VTN-N A14700包被条件下iPSC在Day 2、Day 4和Day 7的显微镜照片](https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12003223/d1a627009c64f8b9eea2d81ee433aff1.jpg)

**图2：Qkine VTN（Qk120）与Thermo Scientific VTN-N（A14700）包被条件下，iPSC在Day 2、Day 4和Day 7的显微镜照片。实验结果由Qkine提供。**

图中包含两种Vitronectin包被条件，但显微镜照片本身不等于完整的定量比较。所引资料没有给出足以支持产品优劣排序的贴附率统计、扩增倍数或显著性检验，因此不能仅凭这些照片写成某一种产品已经显著优于另一种。Day 4和Day 7的汇合度也分别对应所述培养节点，不能把85%与75%直接当作同一孔连续、不经传代培养的下降曲线；要分析生长速率，仍需结合实际接种、传代和计数记录。

## 四、OCT4、NANOG和SOX2检测如何补充形态学判断

细胞贴附并形成集落，是评价培养表现的重要起点，但形态观察并不能独立回答细胞是否保持多能性相关特征。为补充这一维度，Qkine对Qk120包被培养的iPSC进行了免疫荧光检测，观察OCT4、NANOG及SOX2的表达。所引资料提供的图像显示了这些多能性相关标志物的染色信号，使评价从“能否生长”进一步延伸到“培养后是否仍具有相应分子特征”。

![Qk120培养的iPSC的OCT4与NANOG免疫荧光染色](https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12003223/cec2553f8e60d5d186d7686ce19261aa.jpg)

**图3：Qk120培养的iPSC的OCT4、NANOG免疫荧光染色。所有图像均使用EVOS M5000在20倍放大下拍摄，实验结果由Qkine提供。**

**分图说明：**（A）明场成像；（B）NANOG、OCT4与Hoechst；（C）NANOG与Hoechst；（D）OCT4与Hoechst；（E）Hoechst；（F）NANOG；（G）OCT4。

![Qk120培养的iPSC的SOX2免疫荧光染色](https://developer.qcloudimg.com/http-save/yehe-12003223/af2882887b7b9ea1c09f4b4533a290c4.jpg)

**图4：Qk120培养的iPSC的SOX2免疫荧光染色。所有图像均使用EVOS M5000在20倍放大下拍摄，实验结果由Qkine提供。**

**分图说明：**（A）明场成像；（B）SOX2与Hoechst染色；（C）SOX2。

这组结果支持的是所展示培养条件下的多能性相关标志物表达，不能进一步替代长期连续传代、遗传稳定性或特定分化功能的验证。所引资料也没有提供这些标志物的阳性细胞比例、荧光强度定量或不同处理间的统计比较，因此不宜从代表性图像推导出“全部细胞均维持相同状态”之类结论。对于具体细胞系，更合理的评价方式是结合形态、标志物和目标研究所需的其他功能检测，逐步判断培养状态是否符合要求。

## 五、从原厂验证转入实验室体系，需要保留哪些包被条件

原厂培养结果需要放回对应操作条件中理解。Qk120的参考包被方案包括1mg/mL储备液、5μg/mL工作液、不含Ca²⁺和Mg²⁺的PBS，以及37℃至少2小时的包被条件；对于6孔板，单孔使用1mL工作液。下表保留所引资料中的参数，便于将培养观察与具体基质处理条件对应起来。

| 项目 | 推荐条件 |
| :---: | :---: |
| 储备液浓度 | 1mg/mL |
| 工作液浓度 | 5μg/mL |
| 稀释液 | 不含 Ca²⁺、Mg²⁺ 的 PBS |
| 包被温度 | 37℃ |
| 包被时间 | 至少 2 小时 |
| 6 孔板单孔用量 | 1mL 工作液 |

**表1：Qk120培养板包被参考条件。**

实际使用时，应先按产品说明复溶冻干粉，再将储备液稀释到工作浓度，并根据培养板规格和培养面积调整包被液体积。表中的5μg/mL是包被工作液浓度，1mL是6孔板单孔包被用量，均不应直接理解成细胞接种后的培养基配方。若实验室同时更换培养基、传代方法或细胞来源，即使维持相同包被浓度，也不能默认会得到与原厂完全相同的培养结果。

## 六、iPSC培养证据能否直接延伸到定向分化和类器官研究

Vitronectin的应用并不限于iPSC贴附扩增。所引资料所列应用方向还包括ESC培养、多能干细胞定向分化、神经及中胚层等谱系体系开发，以及类器官相关的细胞贴附、增殖和基质环境研究。组成明确、无动物源成分的材料也可作为再生医学与转化研究中培养体系开发的候选组分。不过，这些应用方向与本文展示的iPSC形态、标志物数据属于不同层次的信息，不能将它们全部解释成已经由同一组实验完成验证。

例如，在扩增培养中观察到OCT4、NANOG和SOX2表达，并不能直接给出后续神经分化效率或类器官形成效率。不同谱系、细胞类型和培养阶段对基质的要求可能存在差异，研究人员需要根据目标终点评价其适用性。对于类器官体系，二维包被材料的应用信息也不足以证明其能够直接替代既有三维培养基质，应根据具体培养方式和结构需求开展验证。

## 七、如何把材料质量与培养结果放在同一评价框架中

选择iPSC包被基质，可以依次关注材料信息、操作条件和细胞结果。材料信息包括蛋白身份、物种来源、组成及质量指标；操作条件包括复溶、工作浓度、单孔体积、包被温度与时间；细胞结果则包括接种后贴附、集落变化、多能性相关标志物和目标研究所需的功能。三个层面相互关联，但不能彼此替代：原料质量指标不能直接给出细胞功能结论，一张集落照片也不能覆盖长期培养的全部评价内容。

Qk120资料提供的价值，在于同时呈现了明确的产品信息、可追踪的包被参数以及iPSC培养图像，便于研究人员据此开展适用性验证。现有结果支持其在所述E8-like体系中用于iPSC培养；对于其他细胞系、更长培养周期或新的分化方向，仍需补充与研究目标对应的证据。这样使用原厂数据，更有助于形成可解释、可复核的培养条件。

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## 八、常见问题（FAQ）

### 1. Vitronectin的纯度＞98%，是否意味着iPSC贴附率也＞98%？

不是。纯度描述的是蛋白样品的质量属性，贴附率描述的是细胞接种后在特定条件下的行为，两者的检测对象和计算方式不同。Qk120所引资料中的＞98%来自SDS-PAGE定量分析，不能转写成iPSC贴附率；同样，＞95%的蛋白回收率也不是细胞存活率或培养成功率。

### 2. 使用AOF的Qk120以后，整个体系就属于无动物源培养吗？

需要继续核对其他培养组分。AOF是Qk120自身的产品属性，而整个流程还涉及培养基、添加物及其他接触材料，因此应在完整流程层面判断动物源成分是否被排除。单独选择一种AOF基质蛋白，可以满足该材料环节的要求，但不能替代对其他组分的确认。

### 3. OCT4、NANOG、SOX2染色阳性，是否已经证明长期培养稳定？

这些结果为相应培养节点的多能性相关特征提供支持，但不能单独证明长期培养中的全部稳定性，也不能代替目标分化功能验证。对于需要持续扩增的细胞系，应结合连续培养记录、形态和适当检测进行综合评价，避免将某一时间点的代表性图像解释为整个培养周期的完整结论。

### 4. Qk120能否用于所有iPSC、ESC及类器官体系？

现有资料提供了相关应用方向和特定iPSC体系的验证结果，但没有证明所有细胞类型均可直接使用同一条件。实际选择需要结合细胞系、培养基、培养阶段和研究终点，尤其在从多能性维持转向定向分化或三维培养时，应重新确认基质与目标体系的适配情况。

## 资料来源

[1] Qkine. Recombinant human vitronectin protein（Qk120）产品资料及培养板包被说明。

[2] Qkine提供的Qk120 iPSC培养验证图像：Day 2、Day 4、Day 7形态观察，以及OCT4、NANOG、SOX2免疫荧光结果。

> 本文基于Qkine Qk120产品资料及原厂iPSC培养验证数据，用于重组人玻连蛋白、无饲养层培养和多能性相关特征评价的科研技术参考。文中结果对应所述包被及培养条件，不代表所有细胞系、长期培养或下游分化体系均已获得相同验证。

诱导多能干细胞（iPSC）的培养稳定性与培养基、传代操作和细胞外基质共同相关。对于采用无饲养层培养的研究，重组人玻连蛋白Vitronectin能否支持细胞贴附、集落生长和多能性相关特征，需要结合蛋白质量指标与实际培养数据判断。本文以Qkine截短型重组人Vitronectin（Qk120）为例，介绍其组成、纯度、内毒素和蛋白回收率等信息，并分析5μg/mL包被、E8-like培养基条件下的iPSC形态观察及OCT4、NANOG、SOX2免疫荧光结果，说明这些证据能够支持哪些结论，以及将其用于长期培养、定向分化和类器官研究时仍需验证的内容。

iPSC无饲养层培养如何选择Vitronectin？Qk120贴附表现与多能性标志物解析

诱导多能干细胞（iPSC）的培养稳定性与培养基、传代操作和细胞外基质共同相关。对于采用无饲养层培养的研究，重组人玻连蛋白Vitronectin能否支持细胞贴附、集落生长和多能性相关特征，需要结合蛋白质量指标与实际培养数据判断。本文以Qkine截短型重组人Vitronectin（Qk120）为例，介绍其组成、纯度、内毒素和蛋白回收率等信息，并分析5μg/mL包被、E8-like培养基条件下……

应用科学家

其他

本文探讨Qkine截短型重组人玻连蛋白Qk120在iPSC无饲养层培养中的应用，通过5μg/mL包被及E8-like培养基下的形态观察与OCT4、NANOG、SOX2免疫荧光检测，验证其支持细胞贴附、集落生长及多能性维持。文章强调需结合材料质量、操作条件与细胞结果综合评估，并指出长期培养及分化应用仍需补充验证。

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