动物模型构建与评估丨短暂性大脑中动脉栓塞大鼠模型

《动物模型构建与行为学评估》电子版pdf，网盘发货

《动物模型构建与行为学评估》V1.0共计约540页，主要围绕生物医学领域中动物实验的核心方法，详细介绍了如何通过构建动物模型来研究疾病机理，并且使用行为学评估手段验证这些模型的有效性。书中的内容适用于研究人员在进行神经科学、药理学、生物医学等领域的实验时，理解和运用动物模型这一重要工具。

利用线栓法制备大鼠短暂性大脑中动脉栓塞(tran-sient middle cerebral artery occlusion，t－MCAO)模型，通过刺激左侧迷走神经后，观察大鼠神经行为学、脑组织病理。

对象与方法：

动物分组：

雄性SD大鼠60只，4．5～5．0月龄，体重270～280g，清洁级。根据实验操作流程不同将大鼠随机分成3组，即迷走神经刺激组(VNS组，造模后予迷走神经刺激)、模型组(Model组，重复VNS组步骤但不刺激迷走神经)及假手术组(假手术组，重复VNS组步骤，但不栓塞大脑中动脉及刺激迷走神经)，每组20只。

模型建立：

VNS组和模型组均采用线栓法行右侧大脑中动脉栓塞术，术后2h拔出栓线，建立t－MCAO模型。综合参考Longa等和Chiang等造模方法，具体过程及注意事项如下:术前禁食24h，但不禁水摄入。用硅胶包被3号鱼线的一侧头端制备好栓线，控制线头直径(0．45±0．02)mm。腹腔注射麻醉(10%水合氯醛，3．0ml/kg)后1h再行栓塞术，以确保大鼠术后0．5h内苏醒。颈部腹侧消毒(5%聚维酮碘溶液)后沿正中线皮肤切开，分离右侧迷走神经、颈总动脉及颈内外动脉。结扎颈外动脉、微动脉夹夹闭颈总动脉及颈内动脉，在结扎线的近心端剪断颈外动脉。栓线经颈外动脉的开放端口插入颈内动脉并继续深入直至遇阻力后停止(进线长度约17～19mm)，此时栓线头端已进入并栓塞大脑中动脉，开始记录栓塞时间。术中注意保暖，维持肛温度37．5～38．5℃。对栓塞术后0．5h内苏醒的大鼠采用Longa的评分法判断造模是否成功，将缺血后0．5h评分为1～2分的大鼠纳入下一步实验，并且排除出现以下情况的大鼠:术中出血超过2ml、术后24h内死亡、术后2h无苏醒、解剖取脑时发现出血。假手术组重复上述造模步骤，唯一不同为第5步:栓线进入右侧大脑中动脉后立即回退5mm，保证栓线头端未栓塞大脑中动脉，2h后同样予完全拔除。  

迷走神经刺激：

因左侧迷走神经发出支配心脏的传出纤维较少，且以支配房室结为主，刺激时对心率及血压影响相对较小，故选择刺激左侧迷走神经。根据Smith等描述方法制备神经刺激电极，分离暴露神经后将其植入并妥善固定，注意防止牵拉。VNS组在栓塞术后0．5h开始行左侧迷走神经刺激，刺激仪参数设置如下:电流0．5mA，电压2V，单向波，波宽0．3ms，波间隙49．7ms，频率20Hz，间断时间270s(即每5min内刺激30s休息270s)。模型组和假手术组仅连接刺激仪，但不通电刺激。

观察指标

神经行为学评分 所有大鼠均于术后24h行神经行为学评分，有研究报道的评分方法。

Table1 Garcia评分标准