首页
学习
活动
专区
圈层
工具
发布
精选内容/技术社群/优惠产品,尽在小程序
立即前往

WB转膜全攻略

Western Blot(蛋白免疫印迹)是分子生物学中检测特定蛋白质的关键技术,而转膜作为其中的核心步骤,直接影响实验结果的准确性。本文将详细介绍转膜的原理、操作步骤及常见问题,帮助新手快速掌握技巧。

一、转膜的作用与原理

转膜是将凝胶电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到固相载体(如PVDF膜或硝酸纤维素膜)的过程。通过电场驱动,蛋白质从凝胶迁移至膜上,便于后续抗体孵育和显色检测。

二、转膜方法分类

湿转法(最常用)

适用于大多数蛋白质,尤其是高分子量蛋白(>100 kDa)。

转膜时间长(60-90分钟),需低温环境(冰浴或冷室)。

半干转法

适用于低分子量蛋白(<50 kDa),速度快(15-30分钟)。

对缓冲液和电流要求严格,易发热需控制温度。

三、湿转法操作步骤(以PVDF膜为例)

准备转膜装置

将转膜夹、海绵垫、滤纸、膜浸泡于转膜缓冲液(含甲醇)中10分钟。

注意:PVDF膜需用甲醇预激活30秒,NC膜无需此步骤。

组装转膜“三明治”

按顺序叠放:阴极板海绵垫滤纸凝胶PVDF膜滤纸海绵垫阳极板。

关键技巧:用玻璃棒轻轻滚动排除气泡,避免转膜不均。

设置转膜参数

恒流模式:200-300 mA(根据膜面积调整),时间1-2小时。

高分子量蛋白:可延长转膜时间或降低电流防止过热。

转膜后处理

取出膜,用丽春红染色(可选)确认转膜效果,随后用TBST洗去染料。

四、常见问题与解决方案

转膜后无信号

可能原因:电流/时间不足、膜未激活、方向装反。

对策:检查转膜装置方向,确保PVDF膜充分激活。

背景高或非特异性条带

可能原因:膜未封闭完全、抗体浓度过高。

对策:延长封闭时间(推荐5%脱脂奶粉封闭1小时),优化抗体稀释比例。

高分子量蛋白转膜困难

对策:改用0.45 μm厚PVDF膜,延长转膜时间至2小时以上。

五、抗体选择:实验成功的关键

高质量抗体是Western Blot的核心。博研生物推出限时特惠:

666元即享6支抗体套装(3支一抗+3支二抗)

  • 发表于:
  • 原文链接https://page.om.qq.com/page/OM6ni1mIqc8XDQsBP03lwOkQ0
  • 腾讯「腾讯云开发者社区」是腾讯内容开放平台帐号(企鹅号)传播渠道之一,根据《腾讯内容开放平台服务协议》转载发布内容。
  • 如有侵权,请联系 cloudcommunity@tencent.com 删除。

扫码

添加站长 进交流群

领取专属 10元无门槛券

私享最新 技术干货

扫码加入开发者社群
领券