【技术】谷歌利用深度学习结合荧光标记，准确预估显微图像

AiTechYun

编辑：chux

在生物学和医学领域，显微技术为研究人员提供人肉眼无法观察到的细胞和分子的细节。透射光显微镜能够将生物样本照亮的同时进行成像，技术相对简单，且耐受度高，然而缺点是产生的图像很难被合理评估。而在荧光显微镜下，生物样本（如细胞核）是专门针对荧光分子的，虽然分析过程有所简化，但需要事先的样本准备很麻烦。 随着机器学习在显微技术领域的深入应用，包括将算法用于自动评估图像质量以及协助病理学家诊断癌组织，就此而言，是否可以通过结合两种显微技术优势，同时将两种技术的缺陷最小化，开发一个深入学习系统？

从《硅片标记：从未被标记的图片中预测荧光标记》（In Silico Labeling: Predicting Fluorescent Labels in Unlabeled Images）一文中可以看出，深层神经网络可以从透射光图像中预测荧光图像，生成带有标记的有利用价值的图像，同时可能会用未改变特性的细胞进行纵向研究，以及微创细胞筛查的细胞疗法，并使用大量同时的标记进行调查研究。

谷歌开源了网络，提供完整的培训、测试数据，训练模型检查点和示例代码。

研究背景

透射光显微镜技术便于使用，但对产生的图像很难进行评估。例如下图，来源于相衬显微镜，当光线穿过样品时，其发生移相的程度用一个像素的强度代表。

利用诱导多能干细胞培养的人类运动神经元透射光图像（相衬显微镜）。图样1显示了一组细胞，可能是神经元。图样2显示了模糊的底层细胞，图像有缺陷。图样3显示了神经突。图样4开始显示的可能是死细胞。

比例尺：40μm

这一组图和以下图片均来源于Gladston研究所的Finkbeiner实验室

如上图，很难从图样1表明到底有多少细胞，也无法看出图样4中的细胞位置和状态。

*提示：在中上部有一个非常不明显的扁平细胞

另外，如图样3，在聚焦点上也很难得到连贯的结构。

我们可以通过在z堆栈（z-stacks）中获取图像，从而用透射光显微镜获得更多的信息，在（x，y）中记录图像，而z（与相机的距离）系统地变化。这就导致了不同部分的细胞聚集或离开焦点，最终提供了样本的3D结构信息。问题是，通常需要训练有素的眼睛来寻找z堆栈，也就是说对这种z堆栈的分析在很大程度上背离了自动化原则。

下面是一个z堆栈示例：

相同的细胞在相衬显微镜z堆栈中的显示。注意当焦点移动时，其表象的变化。可以看到，图样1右下方的模糊形状是单一的椭圆形细胞，图样4中最右边的细胞在比最上面的细胞还要高，这可能表明它已经历了程序性细胞死亡。

相比之下，荧光显微镜图像更容易分析，因为样本都用到了精心设计的荧光标记，这些荧光能让研究人员看到想要观察的特性。例如，大多数人类细胞都有一个细胞核，所以一个细胞核标记（如下面的蓝色）加上简单的工具，就能够在图像中找到细胞并计算其数量。

相同细胞的荧光显微图像。

蓝色荧光标记集中于DNA，突出了细胞核；绿色荧光标记集中于仅在树突上的蛋白质，即神经结构；红色荧光标记集中于仅在轴突中的蛋白质，是另一种神经结构。

有了这些标记，就更容易理解样本的情况，例如，图样1中绿色和红色标记确认了这是神经元簇；图样3，红色标记显示出那些神经突是轴突，而非树突；图样4，左上方的蓝点显示了一个之前难以察觉到的细胞核，左边细胞缺失的蓝点，表明它是无DNA的细胞碎片。

然而，荧光显微镜有严重的缺陷。首先，样本准备和荧光标记较为复杂且变数大。其次，当样品中存在许多不同的荧光标记时，光谱重叠会使人很难分辨出哪一种颜色属于哪个标记，一般研究人员只能在一个样本中同时控制3到4个标记。

另外，荧光标记可能对细胞有害，有时还可能直接杀死细胞，这使得在需要随着时间推移跟踪细胞的纵向研究中很难使用标记。

利用深度学习进行更多的研究

研究表明深层神经网络能够通过透射光z堆栈预测荧光图像。为了证实这一点，研究者建立了透射光z堆栈，与荧光图像匹配，并训练神经网络通过z堆栈预测荧光图像。下表描述了这一过程：

系统的概述

（A）训练范例的数据集：来源于z堆栈透射光图像与同一场景的荧光图像像素组。使用几种不同的荧光标记生成荧光图像，并在训练中表现有所不同；网格图像显示出没有为给定的例子获得的荧光标记。（B）未经训练的深层网络。（C）用数据A训练。（D）Z堆栈图像的新场景。（E）经过训练的网络C，通过从A学习到的荧光标记，用来预测新图像D中每一个像素。

在这项工作的过程中，研究者受到模块化设计的启发，开发了一种新的神经网络，组成了三种基本构建模块：in-scale结构不会改变特性的空间规模，down-scale结构将空间规模加倍，还有一个up-scale结构将其减半。这种建构将神经网络结构设计的疑难问题分解成两个简单问题：其一，构建模块的安排设计（宏观架构）；其二，构建模块本身的设计（微架构）。研究者利用论文中讨论的设计原则解决了第一个问题，第二个问题是由Google Hypertune提供的自动搜索解决的。

为了确保方法合理，研究者使用来自Alphabet实验室和两个外部合作伙伴的数据来验证模型：即Gladstone研究所的Steve Finkbeiner实验室，以及哈佛的Rubin实验室。

这些数据包含了三种透射光图像模式（亮场、相衬和微分干涉对比），三种文化类型（人类运动神经元分别从诱导多能干细胞、老鼠大脑皮层培养和人类乳腺癌细胞中获得）。结果发现，此方法可以准确地预测几个标记，包括细胞核、细胞类型（如神经系统的细胞）以及细胞状态（如细胞死亡）。

下图显示了模型对于透射光输入的预测，以及运动神经元荧光实况的例子。

图中显示出在透射光和荧光图像中相同的细胞，以及模型预测的荧光标记；图样2显示模型预测了正确的标记，尽管输入图像中存在伪像；图样3中，模型推断出这些过程是轴突，可能由于它们与最近的细胞之间的距离；图样4，模型在顶部显示了难以察觉的细胞，并正确地识别了左边的物体——没有DNA的细胞碎片。

自己动手尝试一下吧

谷歌开源了模型、全部的数据集、训练和推断的代码，以及一个实例。新的标记可通过最少的额外训练数据来学习：在论文和示例代码中，展示了一个新的标记可以从单个图像中学习。这是一种叫做“转移学习”的现象，其中，一个模型可以更快地学习新任务，并且如果模型已经掌握了类似的任务，就可以使用更少的训练数据。