2025第15课：Spatial VDJ原创

好了啊，时间到了。接下来呢，我们来上我们的第15课，哎，关于空间VDJ的一些研究。这个内容呢，可能离大家还比较遥远啊，比较遥远，它不像单细胞VDG，哎，已经大规模推广了。对于空间VDZ来讲，只有哎呀，只有一些比较重要的客户，就是在公司层面有一些比较大的客户，他如果对空间VDJ感兴趣。哎，会给大家会给他那个。呃，属于半研发性质的，给他做一下空间VDZ。空间微地震呢，本身虽然没有一个很好的商业化平台。哎，但是它的原理呢，其实并不复杂。这里面呢，大家可能要有一个。哎，有一个新的视角，就是新一个角度来看待这个我们的，哎，单细胞空间的一个内容。大家都知道这个实成研发了单细胞的一个转录组平台，对吧，单细胞平台有3撇的，有5撇加VPZ的。

啊，当然现在又有了g exx的对吧，这样的话平台的研发，哎，它始终处在一个很前列啊，那么对于我们国内来讲，国内在实成啊研发了这个单细胞平台之后。也有很多人的人在跟风。跟风之后呢，大概从19年开始。哎，大概从一九年开始。哎，到到现在吧，大概4年多5年的样子。总共研发了大概20多款单细胞平台。其中大家最熟知的有，哎，新格园有徐英，还有什么？哎，像哎呀墨竹呀等等都已经大规模推广了。从这个角度可以看出来，哎，国外，哎，很多人都说国外的创新啊，擅长于0~1。

哎，但是我们国内啊，擅长于1~10。啊，当然从这个角度来看，确实是这样，但是这样的情况呢，并不算什么好事。哎，我们更希望有0~1的一个创新。而空间VDZ呢，就是我们需要从0~1创新的一个点，目前还没有一些很好的商业化平台，但是原理并不复杂，哎，每个公司几乎都可以做，但是如何推出一个更加商用化，哎，更加呃实用的一个平台，是我们现在所要解决的一个问题。哎，这个就是VDC的一个结构啊，B3R的链，大家可以简单看一下这个链的一个特点，哎，分为重链和轻链，抗原结合的位置呢，在这个地方。对吧，哎，这个就是抗原结合的地方。大家要注意这个抗原结合的一个特点，哎，首先是这个VV就是高变区，对吧，高变区。同时呢，这个地方，哎，CC就是相对的恒定区，哎，两条链中间用二流键相连。

这个呢，哎，这个地方呢，其实就是我。哎，这个裸露在膜外，哎，这个在膜内，哎，形成了这样一种，哎，跨膜结构。其实呢，这样一个跨膜结构呢，一旦有哎其他的抗原识别，哎，抗原承递细胞承递过来，包括上一节课讲到的微生物也有一定的抗原承递能力，承递过来之后呢，识别了它，从而诱导B细胞或者T细胞。哎，内部发生一些复杂的诶能理生化反应，最后呢，T细胞呢，变成效应T细胞去哎消灭，无论是消灭肿瘤还是外源的一些病原体等等等等，那T呃啊T细胞去消灭啊啊去T细胞去结合到哎肿瘤细胞或者其他病原细胞表面把它消灭掉，而B细胞呢，分泌成这个浆细胞，哎分泌成大量的抗体。哎，抗体，哎弥散到我们的血液循环中，哎，有利到它该到的位置之后呢，把这个。

外源微，呃，外源的一个一原物啊，非体内的一个物质，哎，细胞给它消灭掉。讲这个的原理呢，主要是在这个地方。VDZ在哪个区呢？VDZ在这个，哎，每条链的一个无撇段，就是刚开始的位置。大家都知道，大家都做这个三撇转录组做的非常多，默认都是3撇，对吧，三撇经过这个公司的大力宣传，以及这个。哎，公司的大力宣传以及这个呃，就是说呃设计优化等等等等，成品成本也比较低，哎大家也都呃接受度比较高，导致了三品的这个转录组啊做的非常的多。哎，5撇加VDZ其实也可以啊，就是说我不做3撇，做5撇加VDZVDZ其实也就多个一两千块钱，但是做5撇的话，同样可以拿到全转录组信息。尤其是做肿瘤，做血液的话，哎，通常是要做5写加VDZ的，不过现在看到的大多数文章啊，哎，一般也就只做这个3撇转录组，其实这个是有信息损失的啊。

啊，正因为它在5撇，所以在3撇是捕获不到的，所以说大家如果做了3撇转录组，做它的肿瘤，哎，3撇是无法识别这个VD的信息的。这个没有办法啊。右边这个结构呢，就是TC的结构，大家可以看到TCR其实哎是单链结构，阿尔法贝塔链，当然还有其他的一系列，其中95%以上都是阿尔法贝塔链。嗯，BCR呢是重链和轻链啊，IGI5种重链和轻链的一个相互，哎，不是两种重链和三种轻链的一个相互配合形成了这样一个。相对完美的，哎，就是我们体内的一个结构。VDZ最大的一个特点呢，就是它可以识别抗原。但是。亲和力不足。不像卡替细胞，卡替细胞呢，亲和力，呃，抗原抗体那种亲和力非常的强。

但是我们的VDZ啊，在识别抗原的时候，亲和力并不强。呃，讲这个单细胞VDG的时候，给大家讲过一个例子，就像是这个什么呢，抓娃娃。哎，可能抓一次抓不到，抓两次抓不到，哎，抓100次才能抓到一次，哎，我们的VDZ大概就是这样一个策略，以量取胜，就是大量的去抓，总会抓到它，并且消灭它。啊，这样的话，一方面是量取胜，另一方面呢，确实体现了亲和力的不足，这是我们人体在进化的过程中，自然选择的一个过程，哎，我们的免疫力不能太强，有点风吹草动就引起大量的免疫反应，炎症反应等等，哎，对我们的身体破坏啊。非常的强，哎，这是不可以的，所以慢慢进化过程中啊。演变成了一种亲和力较低，但是数量庞大的一个免疫主库。哎，一旦我们发生了这个。比如说呃，有了一元微生物的侵入，有了这个。医院微生的侵入有了，比如说肿瘤细胞等等，哎，我们就大量的。

呃，有啊，从我们的大量的免疫主库里面，哎，其中有很多的免疫，这个VDJ序列可以识别这个抗啊，识别这个肿瘤细胞的抗原。从而优先复集它，当然优先复集之后啊，前面也讲到过，它复集的不是单一的序列，而是多个序列，叫motif序列。哎，就是说多个序列都可以结合这个抗原，只是亲和力稍有不同，这样的话在量多的情况下，哎，把它消灭掉，哎，这就是我们V机这作用的一个机制，那从我们测序的情况来讲，哎，大家可以看到这个测序的来源。首先呢，也是poly a捕获poly，哎，Poly a和poly t这样一个互补的一个现状，哎，互补的一个情况。哎，互补的时候呢，哎，因为VD这序列在5撇区，对吧，我们想要拿到这个序列，必须把它翻转过来，这个时候呢，呃，实城的这些科学家们想到了一个很好的策略，就是说翻转的时候啊，在这个8口的u mi.

TSO, 就是类似于我们的这个三撇的那个poly t那个结构，哎，加上了三个G，这个G是经过R，经过哎，特殊处理过的。而另一端呢，经过po力T和po离叶结合的时候啊，它在反转录的时候啊，会形成哎3个CCCC，哎，这个和3撇的这个原理啊就有很大的不同了，然后这个G和C别看只有3个，因为经过特殊处理，哎，所以它很快就能配对，并且这个氢结合力啊是比较的强的。最后呢，哎，完成了整个的一个补货的一个过程。啊，这个过程大家应该听公司都介绍过啊。接下来呢，哎，大家了解了解这个，哎，简单的一个过程，前面补货完之后啊干什么？哎，要扩增就是PCR它的量太少了啊，没我们只要测序关于它的一个。数量啊，都要经过PCR疯狂的一个扩增，只不过在扩增的过程中啊。

嗯，5撇和VDZ的这个扩增的一个策略和3撇略有不同啊，像5撇的话，大家可以看到。哎，拿到这个完整的序列，哎，8扣的u mi so, 这个地方是3个G或者3，呃，这个地方是3个C，形成了完整的序列之后，把它酶切掉了。哎，没切掉了，因为我们的转录本都很长，对吧，转录本都很长，但是我们的二代测序呢，只能测这个P150，所以我们测不了这么长。啊，三代测序呢，哎，错误率非常高，这个时候呢，我们就还是要回到二代测序的策略，就是说从这个有效序列往后的，呃，100五左右的这个BP保留，把它没切掉，切成到一定的范围之内。哎，这是瑞德2，就是说这个瑞德2已经是靠近5撇区的一段序列了。啊，然后呢，再加上这个index，哎，从而形成这样一个可以上机测序的一个片段，哎，就是PE150全长大概300的这个内容。

其中啊，在这个负极的过程中，就是在酶切以及扩呃扩增的过程中呢。这个引物的设计啊，哎，很有讲究，就是说引物从外到内依次哎往里递增。一次往里递增。哎，这种PCR的方法呢，在我们的这个生物学上叫潮式PCR。就是说一开始，哎，比如说是这个区域。Al, 就是一开始呢，是外围，呃，朝外的一点区域。过一段时间呢，哎，把把这个引物啊设计的往里面一点。最后呢，再往里面一点等等等等，一直说说说说说说，哎，说到我们的目标判断大小之后呢，哎，加上我们的3POINT index这个过程啊，潮试PCR的过程呢，第一个是负极的更加显著，第二个准确性更高。如果仅仅是用这种单端的，一方面长度是有问题的，另一方面，如果我们一开始就把这个引物设计到哎，合适的这个距离，哎，合适的这个距离上。

通过它的大量扩增，很容易造成这个序列的紊乱。而通过这种潮试，PCR的扩张可以保证我们的文库构建到最后啊，呃，是大多数就99%以上都是我们可以上机测序的一个P于150的一个序列。这就是潮湿PCR的一个原理，将来大家在做研发啊，潮湿PCR在这个测序，哎，测序方面啊，有非常大的一个研究，大家慢慢的以后如果大家有能力，哎，或者说从事这个生物学研发的这个好方向，哎，这个过程啊，是大家经常要用的，尤其三代还经常用啊。这里面简单的做了一个介绍啊，前面哎呀，通过这个，哎，油包水的结构。哎，反转录出了CDNA，获得了这个全长，对吧，获得了全长之后呢，一份去做了这个转录组，一份去做了这个VDZ啊，其中通过设计VDZ和B32这个恒定区的潮式PCR物就是这个蓝条。

VD这3个基因。哎，通过这种潮湿PCR把这个恒定区给它截短。阶段阶段阶段，哎，阶段用于然后去构建文库，最后经过测序，哎，拿到我们真实的这个VDC的一个基因结构。啊，它的设计啊，是比这个三撇转录组要复杂的，因为它要获得更多的信息，所以这个。在设计层面就比三撇转录组要复杂，而且从这个设计优化来看啊，三片转录组大家都知道，一开始它那个一个样本要卖18000，现在只卖1万出头的样子啊，是因为经过了实际优化，但5撇是无法进行实际优化的啊。或者说可以进行数据优化，但是它比较复杂，所以数据优化的过程比较麻烦，所以公司一般不会花精力做它，哎，所以导致了这个现在导致了反而是这个5撇加VDZ的这个效数据的有效性啊，反而比3撇要高了啊。啊，这个例子呢，还是说用这个潮汐PCR的一个复极的过程，哎，复极慢慢复极啊，一步复极短一点，一步复极短一点，最后经过了很多人这个过程复习到我们想要的这个结果。

最后呢，大家看这个序列。拿到这个序列之后啊，其实它的长度是远超过PE150的。就是说我们如果含有VDZ这个序列对吧，如果含有这个VDZ序列怎么办呢？其实它的序列啊，是要是要干嘛超过150的这个时候呢，在比对的时候，哎，一方面有免疫主库。啊，一方面有这个免疫主库啊，用于比对，另一方面呢，也要进行一个拼接。拼接呢，就是多个片段，有的片段呢，覆盖了VVD，哎，部分区域，有的片段呢，只覆盖了V区域，这样的话，通过拼接之后就知道这个细胞内它的VD的序列到底是什么。还有一个就是大家要知道的，单细胞的一个VC序列，通常来讲只有一个派。一个细胞只能表达一种特异性的，这个VDZPI啊，就是成一一对配素体，呃，VDVDC序列，像T细胞就是阿尔法贝塔，哎，B细胞呢，就是重链和轻链。

表达完之后呢，我们通过比对，哎，就可以拿到真实的一个，真实的一个这个。哎，细胞的VDZ序列了啊，右边这张图呢，也是简单，和上面这个图是差不多的啊，差不多的，哎，这里面主要强调潮试PCR在里面的一个作用，以及潮视PCR在扩增的时候是不可以跨过VDJ区的，只能在恒定区进行一个。哎，进行一个超市P3的一个片段的负极，而且C区，哎，C区就是那个恒定区，也要保留一定的判片段，哎，从而测定出C区它到底是什么基因。啊，这是一个简单的一个。过程。接下来呢，就轮到我们的这个空间转录组来捕获我们的VDZ序列了。哎，前面提到了。

单细胞呢，需要把这个poly和poly t诶结合之后呢，翻转一步。翻转一步对吧，翻转到5撇端用于这个补货VDZ。那么对于我们这个wisdom来讲。哎，首先我们来看wisdom wisdom姆也是一种这种poly t和poly a结合的这样一种方式，对吧，然后通过建库的时候呢，也是截短截短，只不过这个时候截短到三撇段了。哎，这个时候呢，就失去了这个VDZ的信息。对吧，那么如果想补从这个空间转入组上捕获这个VD的序列信息，这样的一个默认的策略，哎，当然是不行的，需要用特定的一个恒定，呃，特定的一个序列去特定的一个方法。前面提到过，其实无论三撇还是五撇，拿到的都是哎，全长，就是每个基因全长的一个内容，其实如果我们不截短，哎呀，不往这个三撇处截短，就是这样，这是往五撇处截短，如果我们不往这个无不截短。

哎，其实是捕获到了V1Z结构的一个信息的。对吧。呃，但是空间呢，因为P150的一个是关系，哎，所以我们啊，默认的这种空间，哎，Poly a polyd, 哎，Poly t这种补货的一个结构呢，是无法识别，这是无法获得VDC序列的。当然这是默认的一个情况啊，现在在这种情况下有了更多的一个研发啊，研发的内容啊，其实并不复杂，呃，我在漯河的时候啊，大概4年前，3年前啊，4年前左右啊，当时一个北大的博士看了这个之后，立马就知道该怎么看空间的VDC序列了啊，很简单，只不过呢啊，这个研发过程啊。需要有人支持啊，需要有人支持，第二个就是探针法，哎探针法呢，这个相对简单啊，探针法嘛，就是每个基因的恒定序列对吧，那么这个地方呢，我把这个探针设计成哎这个序列。恒定区的一段序列，那么自然我就可以捕获到VDC序列了，对吧？这个就很简单，探针法相对简单，只不过啊，这个探针要设计进来。

目前这个。啊，实际上并没有设计的这个东西啊，当然后续他会不会设计不太清楚，但是从原理上来讲是比较简单的，他只要设计了这个恒定区。哎，捕获这个恒定区到VDDZ整个的一个哎片段序列，哎，就可以拿到空间的这个VDJ序列了。呃，这里面再提到一句，就是这是哎，类似于FIP那种补货的方式，哎，这是这种poly a尾的这种补货方式。嗯，原位可不可以呢？就是那种或者叫哎。大家提到经常提到的像那种什么德云康瑞的原味平台啊，或者像那个。那其他的各种各样的原文平台可不可以呢？啊，也可以也可以啊，上一节课讲微生物的时候提到过原味平台可以捕获微生物的固定序列，其实啊。VDJ也是一样的，哎呀，只要把这个探针设计进来，原位也可以补货啊。

只不过空间的有一个问题是什么呢？因为我们的空间啊，大多数都不是单细胞纸，比如说像vim，它是55μm，对吧？啊，通常的这个FIP也是55μm，像这个。哎，像这个这个。那个原位啊，虽然是单细胞级，但是大家了解之后应该知道它是切糕模式。就是虽然有一定的厚度，但也不保不能保证这个厚度是完整的，一个细胞只能在一个平面上，哎，告诉你，这是一个完整的细胞轮廓。那么在拿不到完整的细胞的哎前提下呢？很很难啊，一般很难能拿到这个。就是配对的一个VDC序列，比如说这个地方，比如说随便找一个点，它可能含有两个T细胞，对吧，那他们检那检测出来它就有两个派行，但但是这个怎么配对的，哎，就不清楚了啊。大多数情况是什么呢？比如说这个点只能检到一个为例的序列，比如说只能检测到T细胞的阿尔法链。

啊，贝塔链找不见了啊，这种情况是居多的啊，这种情况是居多的，这也是空间为什么没有推广的一个原因啊，因为VDZ派目前还无法解决这个问题。啊，只有一些客户强烈要求说我不需要拍啊，我就想看看这个单链的一个呃，空间分布，以及单链的这个某序列，它的表达特征，哎，才会。做一下，而且这个费用是比较贵的啊，因为带点研发性质。不知道大家对研发有没有认知啊？像这个V空间VDZ这个研发呀，已经是相对很简单了，哎，相对很简单了，哎，借助这个时成的平台，或者借助其他的平台，哎，只要把这个VD的序列复集到就可以，哎，测序就可以拿到，B的就可以拿到，但是就这哎费用也是相当高啊，一般客户都不会承担的。呃，高到什么程度呢？几万是不可以的啊。

几万以上啊。啊，接下来呢，就是关于空间这个VDZ序列的一个简单的一个捕获原理了，这个很简单啊，哎，就和前面一样，三撇端捕获完之后呢，其实捕获的是完整的序列，对吧？完整的CDN序列，因为测序是P150，所以我们要揭短，但只只要我们不揭短。啊，它自然就会有这个VDC序列对吧，所以说嘛，这地这个地方呢。这个地方干嘛，哎，Target application, 就是说这个序列啊，我不复及三撇端。哎，我要复习五撇端就可以啊，就可以复习到呢，虽然大多数都是单链，像这里面它就体现了是TCR贝塔连的一个specific，哎，他为什么不阿不把阿尔法列也设计进来呢？就是前面提到的那个问题，哎，拍压的时候很多是检测不到的，在空间水平上啊检测不到，哎，这个时候呢，通过单链的一个负极，哎，复极完之后呢，怎么办？

哎，复局完之后就可以监库测序了啊，当然很多时候呢，我们希望能够拍啊，但是很多时候做不到拍啊啊哎，它这个里面也提了一个比较有意思的一个内容，就是要哎呀拍on的啊，尽量检测拍啊。哎，Specialbacco的，哎，检测这个VDZPR这样一个序列，不过很多时候是检测不到的，很多时候还是体现出单链。哎，单链，尤其是长链，长链那个更好，更容易捕获一点，像BCR的这个轻链和重链，哎，重链更好，更好捕获一点。哎，这个就是捕获完之后呢，我们就知道每个这个VDC序列，哎，就是阿尔法链或者贝塔链，它的一个空间分布状态是什么？哎，有它是在肿瘤区域呢，还是在监制区域呢，还是在正常区域呢，等等等等，以及在这个空间结构演化的过程中，VDJ是否产生了变化。哎，等等等等，就会拿到这样一个效果了，大家可以明显感觉到其实这个过程啊。虽然并不复杂，但是在操作过程中会和原来的有和和与就是啊，标准化的实生标准化的这个微对值序列啊，哎，有明显的不同，需要一个至少需要一个是吧，实验做实验做研发经验非常丰富的人来给你操作这个人啊。

啊，全国就没多少啊，很少啊很少，而且国内研发的一个环境呢，其实并不太好啊，并不太好。嗯，举个简单的例子就是啊，举个其他方向的例子，比如说肿瘤早筛。哎，这是未来的大方向，诶，在得癌症之前，就是对健康人进行一个预测，看看他得癌的概率，哎，如果他得癌概率高，就是提前就治疗，哎，能迅速把这个癌症给治好，但是这里面涉及到很多的机器算法等等东西，而且见效非常慢。哎，所以说呢，在公司，尤其是临检公司啊，招那些数学家，呃，包括临床呃，研究很深的人。都是什么呢？都是国外的。

哎，都是国外的，哎，他们都研究都是数学方面见长，或者说在临床方面经验丰富。还有一个比较有意思的现象是什么呢？呃，大家看那个华为那个老总，哎，经常说我们这个华为做研发花了花了多少钱，对吧。花了几千亿，几千亿。呃，然后把仪器，把国外的仪器买回来之后发现，哦，原来国外那些搞研发的人还是我们中国人，大家不知道有没有深有体会啊，反正我在，哎，我在这家公司就是新公司，呃，这啊，算是一种新公司吧，待了也有一年了左右。嗯，他也在做肿瘤早筛，也在做这个特检。一开始哎，领导说，诶，我们用了一个美国团队，非常厉害，我一开始以为是美国人，后来哎，聊了之后发现都是协和毕业的博士生，去美国工作不回来了。啊，他们确实非常厉害，我也问过他们为什么不回来，他说国内并没有研发的土壤啊，这个可能我们的环境还需要改善，呃，简简单单是这个空间VDZ的一个简单的一个研发，只是对这个VDZ序列进行一个负极啊。

哎，国内都没什么人支持啊，这样的一个商业化平台其实还是很有效果的啊。右边这张图呢，就是简单的一个复极的过程，大家可以看到，哎，Buck扣的u Ms是吧，然后呢，Poly a和polyt这样捕获之后呢，诶，形成了这个完整的CDNA序列对吧？完整的CDNA序列，这是三撇端，这是5表端，复极的时候呢，用专门的这个引物来复极，这个引物要专门的设计啊，不能是我们普通的那种引物，需要有这种。哎，可变区的一个，我来复集这个可变区呢，就是说要把那个VDJ那个文库啊。就是说我们都知道，我们每个人有大量的免疫组库，哎，这些免疫组库都要设计成探针用来负极。哎，只要这个探针结合上去了，把它复制出来，最后呢，形成一个完整的一个PE150的一个序列，哎，用于下游测系就可以了，仅仅是这个引物这个方向设计方向上有一些偏差啊，有一些偏差。

上面提到的这个单细胞序列啊，它在潮湿的时候是吧，它都是恒定序。哎，它都是恒定区，所以它的序列相对简单，商用化很快，但是真正翻转过来之后啊，我们要复集这个五撇端的这个一开始的这个区域，大家都知道一开始是什么区。啊，一开始就是这个。诶，哪儿去了，一开始就是VBZ区，而这个地方啊，变化非常剧烈，前面提到过我们的免疫主播变化非常的大，对吧，变化非常的剧烈，经常有一种什么超突变啊，重排等现象，那么这个时候设计探针的时候啊，就要把这些情况都考虑进去。进行设计，哎，考虑进去之后呢，就可以简单复极了，复集完之后呢，就可以拿到哎，空间级别的VDC序列，只不过这个呀，探针设计需要点功力啊，需要点功力，哎，不是一般人可以设计得到的啊。嗯，尤其是那个啊，当然这个序列序列设计啊，比那个。

外显值分析，外显子大家都知道有panel对吧，各个基因的panel序列，哎，那个panel序列呢，也是经过探针设计的，只不过这个探针设计啊，它是参考的基因组，哎，基因组的序列也是相对恒定的，不会发生突变，正常的一个情况，哎，但是这个VDG序列这个引物的设计啊，比那个外显子就要更复杂了啊。这就是简单的一个过程啊，简单的一个过程。然后呢，现在有一些高分文献啊，已经开始慢慢的。哎，引用这个分析方法了，像这篇文献呢，大家随便一搜就能搜到，就是special v DJ, 哎，随便搜都能搜到，它的一个作用就在于什么。哎，第一方面是捕获了这个空间的一个。表达信息对吧，第二个呢，它就是为了捕获空间的这个VDZ信息。VD的信息。啊，这个示意图呢，大家可以简单的看一下，首先拿到这个全长的CDNA对吧，全长的CDNA它也是一样的，去专门复集了这个VDJ区VDJ这个区域。

哎，和前面提到的那个原理差不多，专门去复极VB这区域，哎，然后通过这种它是通过如果是全长的话，通过这种滚环复制。哎，得到这个全长的序列，如果像我们一样，只要这个VDZ这个序列，哎，P150这样的一个测距策略的话，哎，短序列呢，就直接复极这个目标区域就可以了，然后呢，呃，也得到了这个空间这个转录组的一个信息。嗯。拿到之后呢，就可以把它投到我们的空间上进行看看了，其实如果大家真正的做过空间VDJ，嗯，当然我就做过一次啊，做的很少，因为这个地方确实做的人非常少，只有一些。啊，只有协和的，呃，有一次他要求做啊，协和有一次要求做，因为他确实要看这个VDZ，它在空间的区域的分布是什么样的状态，而且他后续还要对这个VDC序列进行工程改造，提高其清活力，做这个TCRT疗法。

哎，所以他专门做了一个。嗯，做了一个之后呢，首先呢，我们要知道第一个VDJ序列的空间排布啊，是有一定的特点的。经常大家听别人说，或者做单细胞VD的，呃，一个分析呢，都会说我们在得了疾病或者说拥有肿瘤细胞之后，会特异性的负极VD的序列。对吧，但是VD的序列负极的时候啊，它不是那种准准的复制，哎，前面提到了，往往是多种VDJ序列都有识别抗原的一个能力，所以哎，很多文章在分析VDZ的时候都会说。哎，我这个经过肿瘤细胞或者得了疾病的状态下，VDC的一个多样性变多了。对吧？经常会说这样的一个结论，那么多样性变多的缘由是什么呢？就在于第一方面确实显著富集了某些VDJ序列，对吧？这些VDJ序列同哎，都可以起到识别抗原的作用。第二个就是要从这种哎显著变毒的VDG序列中分析出我们哎核心的某T序列。

母序列，哎，前面解释过，有些区域相对恒定，有些区域变化比较大，形成了这个。哎，形成了这个motif序列，这也是未来TCRT研究的一个核心和关键啊。核心和关键，哎，右边这张图呢，大家就可以看到了，哎，像这种正常的一个，哎，克隆和。正常的克隆，诶和这个肿瘤细胞的一个关系。哎，很明显啊，我们的TCR其实也有肿瘤特异性啊，像这种有的TCR呢，有的这个VDC序列呢，在这个肿瘤的呃，一个在肿瘤的一个区域，呃，另外的TCR的肿瘤的另外的一个区域啊，他们是呃肿瘤具有抑制性，所以说呢，每个肿瘤细胞啊，或者是叫每类肿瘤细胞，它呈现的抗原啊，其实是有区别的，那么在不同的位置呢，就要用特别呃不同的这个V粒的序列来识别它。当然单细胞我们已丧失了空间信息之后啊，已经无法知道这个有效信息了，那只能借助空间的力量，空间的力量呢，就会告诉你，哎，肿瘤的抑制性是怎样的，哪些肿瘤抑制性，哎，免疫细胞是可以浸润的，并且可以识别杀灭它的，而哪些肿瘤区域呢？哎，免产生了免疫逃逸，产生了这个浸润不浸润预后很差的一个现象，哎，等等等等这些消息，这些信息呢，只能通过这个空间转录度加VD的信息，以及这个形态学信息来获得了。

从应用层面上来讲，空间VDC当然应用的一个前景更广啊，前景的更广，只不过现在啊，嗯，还没有大规模推广啊。嗯，这里稍微提一下那个关于单细胞VDZ序列的一个分析，哎，前面提到过单细胞VDZ序列呢，比如说正常和疾病状态下，大家测了这个无撇加VDZ的这样一个数据。哎，提到过，为了可以识别出哎，可以针对有效抗原的微地震序列，需要我们前期进行大量的工作，哎，首先对两个样本的T细胞进行降维聚类整合。

哎，定义完之后呢。识别出哎，肿瘤细胞或者说疾病，哎疾病样本，肿瘤样本或者疾病样本，它占据主导，哎或者说它独有的微细呃，T细胞小群或者B细胞小群。哎，这个群呢，如果是这个免疫，呃，这个免疫小群，如果是这个疾病独有，或者说疾病占主导，占绝大多数。啊，那么从单细胞的角度来看，很可能，哎，这个小群所含的VBC序列就是可以识别这个。哎，肿瘤的这个抗原的，或者说疾病的这个抗原的。啊，当然了，呃，很多抗原识别大家都知道，是这种接触式的抗原成地也要接触才可以识别，呃，所以说呢，在没有空间信息的状态下，只能这种比较粗放式的分析。啊，但是空间呢，当然我们可以分析的精细一点。

啊，只不过平台还不好啊，需要。啊，需要大家花更多的钱和公司合作做一定的研发啊，而且这个。空间V率这序列还有一个比较明显的问题是量比较少啊，量比较少。呃，大家可以看到每个VDJ序列，如果这是一个正常的哎，5000PORT的一个切片的话，它整个的有VDZ的一个点啊，也就几百哎，甚至几十个哎，量比较少，所以对后续的这个测序啊，饱和度的一个要求啊，都是比较高的啊。右边这张图呢，简单罗列了这个文章啊，这篇文章发到了一个很高啊，嗯，发发到了很高，嗯，这里边右边呢，简单的罗列一下，呃，介绍了一下关于空间VDZ的一个测序原理，其实呢，它也是借助了10×VZM平台啊一样的。捕获了这个三撇之后呢，哎，得到了全长的CDNA，然后呢，片段化步骤之前呢，CDR序列可以从全长的CDN中，哎，就是说全长的CD不进行给它进行一个潮湿的缩短。

哎。直接全长PCR，哎，就能够获得TCR的序列，哎，同时就获得了VDZ和这个短录本的信息了。这是一个简单的运用事例啊，也是这篇文章的，呃，运用事例首先呢，拿到这个人类这个。这叫啊，这个部位叫什么，反正就是这个部位吧，口腔的一个部位，哎，拿到之后呢，做这个空间绕路组。哎，做空间转漏组呢，哎，大家可以看到，哎，靶向负极的时候是IG和TR，就是说对免疫区域进行一个负极，负极的时候呢，哎。这里面它依然呃用的是这什么恒定区的一个panel，哎，恒定区的一个序列做一个复极，哎类似于潮湿PCR进行复极，复极之后呢，哎，就可以拿到这个VED这三个区域的一个序列信息了，对吧，然后进行PCR大量的扩增，扩增完之后呢，上机测序，如果想要全程就用这个三代测序，哎，滚环复制，如果想要和我们二代测序一样，紧要VDZ的一个序列，哎，就用这个。

哎，P150策略就可以了，这个地方为什么要滚环呢。哎，为什么要滚滑呢？因为我们的VD的序列，虽然我们前面提到了这个。嗯。啊，前面提到了这个VB的序列是。哎呀，没有那个示意图啊，VD这序列，我们真正的那个单细胞VD这序列，或者说类似于短的VD这序列啊，它处于CDR三区。而其他的CDR1CDR2也是一种高变区，它在识别抗原也是发挥了作用的，只不过CDR3啊，起到了主要的一个作用，哎，那么在这个呃，主要的一个条件下呢，我们优先识别CDR3，所以短序列是CDR3，全程呢就都包括了CDR123都有。哎，通过这种哎，无论全长还是短序列分析啊，就会以拿到空间的一个VDC分布了，其实大家要看一下啊，它这个示意图其实给的很明显。

真正的能够识别出来的VD的序列都非常少啊，都非常少，同时也要结合形态学进行判断，哎，它在哪一个温轨。哎，这其实如果序列非常少，对我们的分析来讲，哎，是好事啊，数据越少越简单。对吧。下面这张图呢，就是简单介绍了，就是使用了哎针对TR和I及恒定区的杂交补货探针来复极抗原受集转化，呃，就是这个为为了复极VDZ，它前面一段的恒定区呢，哎，专门用来进行潮湿负极啊，哎，同时也保留了空间条形码唯一识别符和全程哎，受体的一个序列啊。这个图呢，就是说原位平台的一个捕货策略啊，前面提到了，哎，VM姆，哎，是poly和poly dt, 这个需要专门的探针设计，诶设计出那个靶向探针，专门负极无撇端的一个。哎，VDJ序列。

呃，对于那个一反FFP那种平台，哎，直接就是探针法的那种平台，要把这个VDZ这个固有的探针给它设计进来，哎，也可以补货啊，对于原味来讲也是一样的道理，其实也是探针法。哎，拿到了人格组织之后呢，也是要进行一个探针的。只不过大家可以看到。这篇高分文章啊，他在补货的时候用的是恒定区进行复集，只不过恒定区啊，有一个很大的问题是什么？是什么呢？就是说八口的u mi在这个地方，如果进行尝试复习的话，很容易把这个丢了。对吧，巴克的UI丢了，那就是无效瑞则啊，所以说呢，它采用了这样一个。呃，这种U型环的一个策略，哎，尽量保护它这个巴克的u Ms机仍保留在这个。片段少。哎，从12从而可以实现它的负极，不过这种方式啊，虽然发动了很高，但是从这个呃，研发的角度来看，确实不太稳定。而真正的稳定呢，就是第一种讲的那种方式，哎，在这个负极的时候啊，采用了这个VV的这个。

微区的这个基因基金潮湿补集。哎，这个地方呢，就会拿到一个，哎，相对的完整，哎，也比较好的一个方法，只不过这样探针设计就非常的复杂了。哎，要设计微曲，微曲呢，就是有大量的可变的序列，这样的话，哎呀，这个探针设计就会非常的复杂啊。哎，探针的设计就会非常的复杂，从而实现这个VDZ序列的一个负极，这个时候呢，探针不再是这个恒定区了，哎，原位平台采用了这样一种策略，和这个最开始的这种策略是一样的啊，就是设计这个可变区的一个探针，这样的探针数量会非常的多啊，拿到之后呢，就可以拿到这种哎，每个TCRVDJ序列的一个。变化的一个区域了，对吧。哎，每个区域它每个VDJ序列，哎，复集到哪个区域了，哎，等等等等，把这些区域的特征识别一下，就可以拿到我们核那核心区域的一个某T的一个分析了啊。

哎，这个是简单的一个分析的一个结果啊，这是文章的结果啊，之前做过一个项目，也会拿到类似这样的结果，只不过呀，大家可以看一下。哎，确实风度不高啊，风度不高，对于我们空间转录组来讲，风度就会偏低啊偏低。嗯，即使是T是啊，嗯，即使是T，这个和这个肿瘤细胞接触式的这样一个捕获。哎，它的整体的序列也不是它的整体的风度啊，也不是很高，只能捕获到单链，它的一个空间分布状态，拍ya就很少啊，拍A很少能捕获到的，所以说呢，这就是他们的一个。哎，分析的难度，以及在这个整个的研发过程中啊，需要克服的问题了。当然应用前景确实是比较高的啊，应用前景确实是比较高的，呃，那么如果在这种情况下，如果谁能优先推出这样一个平台。就像空间微生物或者空间哎包内微生物这样一个新的平台，哎，就会优先占据制高点，只不过这样的一个研发的一个能力啊。

呃，一般国外先有啊，我们国内可能，呃，0~1这个过程还是比较的费劲啊，比较的费劲，1~10当然很快啊，就像单细胞平台一样。国外有了1，哎，我们立马就能做到10啊，这样导致显得我们好像很卷啊。哎呀，这个图也是一样的啊，也是一样的。哎，捕获到的VD值序列，哎，返回到空间看它的一个结构啊，其实如果大家将来啊，如果将来真的能做到空间VDJ的一个。分析分布的话都会发现，哎，VDC分布，它也是恒定区域，有固定的某if序列。哎，把每个区域固定的某T序列分析出来，一般这个某T序列就是能够针，就是能够针对这个固定区域的一个，是拥有固定区域的一个识别能力。比如说肿瘤区，如果说T细胞进去，哎，在肿瘤区域实现了这个浸润，哎，我们把这部分T细胞的VDC序列拿出来，呃，进行一个某T分析，那大概率啊，这个VDZ序列就是可以识别肿瘤细胞的，接下来呢，我们把这个序列呢，经过某T分析，经过基因工程改造。

呃，包括这个T细胞改造，哎，很有可能就能为我们工科肿瘤提供一个很好的哎，很好的一个思和方法，这就是目前。继卡之后。TCRT的研究的一个主要思路啊，只不过现在TCRT研究啊。呃，一般借助那个荧光的那种方法。哎，看看这个TCR序列在哪儿分布，第二个呢，就是说运用这种，呃，设计好之后呢，第二个要第二个难点就是基因工程改造。T12的亲和力主不呃，不好，那我们就要把它改造的亲和力增强。

它能立马识别肿瘤细胞，并且杀灭它，同时还不能说把正常细胞哎错误的识别，这个时候呢，哎就要进行基因工程改造，基因工程改造是涉及到什么蛋白结构，哎，这是11工在做的一个内容，哎，蛋白结构还有这种分子对接，冷冻电竞啊，这样非常高端的一个分析啊，将来大家如果从事这方面才会接触到入世高端的一个仪器和研究啊，它也属这些方向啊，也属于生性分析的一个范畴，就是蛋白结构研究也属于生性，冷冻电镜结构解析也属于生性，分子对接啊，也是属于生性范畴，生性这个范围非常大，像我们这种简单的，呃，做简单分析的处于其实是处于身心的最低端。啊，私信的最低端只是调用别人的方法，我们来用用啊。这里面呢，就提到了关于空间VDZ的一个配对的问题啊，这个没有办法啊，目前空间VDZ即使是和公司研发也很难实现这种配对，呃，一方面呢，是因为这个。

哎，每个点它处于多个细胞状态。哎，很可能检测到多个配对，或者是没有配对，这种情况居多啊，另外一个如果用原位平台的话，即使他拿到了单个细胞的一个平面的一个空间分布。啊，其实也很难找到配对的，为什么呢？因为呃切高模式嘛，切高之后呢，它的这个立体层面是不是单个细胞的厚度啊，存移啊存移所以导致呢，在空间威力的应用上面还存在着比较大的一个挑战啊。比较大的一个挑战，不过呢，大家非要做的话。呃，公司也能做啊，非要做就是说公司我一定要复集一下VDC序列，我看看它的一个，呃，比如说阿尔法链或者贝塔链，它的空间的一个分布状态，呃，公司也能做，只不过费用比较高啊，一般客户承受不了。哎，这个就是高分文章的应用了啊，高分文章的应用了。哎，这个文章应用啊，它专门的做了一个自己实验室研发了这样一个方法，专门复集VDJ序列，并且看它的VDJ的一个分布，并且进行了一个聚类。

哎，这种剧烈方式之前提到过啊，之前提到过，它不是类似于单细胞那种剧烈方法。而是什么呢？序列剧类方法，就是两个序列的相似度的聚类方法，而且这个序列相似度啊，不能简单简简单单靠字母来识别，比如A和T。哎，它们不一样，是不是应该分开呢？不是啊，VD这序列的剧类呢，包括两，呃，就是说前面提到过，要根据氨基酸的一个性质进行分类，比如说都是碱性氨基酸，都是酸性氨基酸，那它们在酚类的时候呢，诶，它们的距离就应该相互接近一点，而不同种类，比如说芳香啊，芳香类氨基酸。嗯，清水性输水性氨基酸，它们之间的分开就应该大一点，而同类内部，比如都是清水的，这个呢，它们的距离就应该小一点，哎，接近一点，通过这样一个在一方面在序列层面，另一方面在这个氨基酸的属性方面，哎综合考虑多方面之后呢，对这个VDJ序列进行一个。

哎，聚类其实聚类完之后啊，每一个类其实都是一个核心的某T序列啊，核心的某if序列。中间这张图呢，也是一样的啊，他们把这个VDG序列啊，放到这个空间上，看看它的一个哎，整体的一个分布状态，当然一方面确实体现了量很少，但是这个量少啊，却确实说明很重要，哎，就像大家常说的一样，真理往往掌握在少数人手中，对于我们免疫免疫这个研究来讲，哎。这个就是真的是这样了，尤其是大家这个画对号的这个。哎，他认为作者认为是有效的VD这序列，就要研究这些序列去了，哎，明白了吧。哎，在我们这个免疫VD这序列中啊，就是真理掌握在少数人当中啊，因为VD这序列主库非常的庞大，但真正能对某一种疾病或者肿瘤起效果的。

哎呀，非常少，那个序列得就像大海捞针似的捞，哎。好了，这个呢，就是右边这张图呢，就是一个简单的一个介绍了，哎，我直接把这个文章的内容给复制出来了，首先对它进行距离定义的时候啊，他建了一个包，哎，叫这个是string，呃，String Dis.哎，代表了这个circle tree啊，它这个里面啊，这个包的算法相对复杂一点啊，大家有空可以了解了解，然后呢，对这个克隆啊进行了一个哎，Family就是分类对吧，分类。哎，分类之后呢，哎，这个直径呢，就产生了这个不同的分类，哎同类之内啊，哎同一个类呢，内部的结构相似，不同类之间呢，相互的呃距离远一点等等等等，但是大家也要看看这个特点，哎呀，它这里面分析的也是单链。哎，说明他在补货的时候也无法拥有这种拍压的能力，检测拍压的能力。好。

好了，这就是我们VDZ的一个介绍了。我们稍微休息5分钟吧，稍微休息5分钟我，哎，给大家简单演示，呃，简单的看一下这个木欺负应该怎么分析啊，其实也非常简单啊，几行代码就可以搞定了，呃，这个地方呢，其实是为了以后做准备。就是将来一旦VDZ哎商用化，那么我们在识别了这个。固定区域的VD的序列之后呢？哎，简单的分析就可以分析得到有效的某T积蓄，哎，对我们的研究非常有帮助。好了啊，我们休息5分钟吧，我们9:20回来啊，休息5分钟。

关于这个空间VDZ的分析啊，其实大家很多时候啊，要把它借鉴到我们的这个，哎，单细胞的VDC分析之上。单细胞的VDC分析前面提到过，哎，分析到什么程度呢？分析到克隆共享。

啊，也就是说肿瘤内的序列和癌防序列有没有共享序列。哎，或者说和血液疾病毒的VDC有没有共享序列，哎，一个是克隆共享，还有个什么。Motif哎，就是今天要给大家实现的motif这个一个分析啊，当然比较简单，第三个是什么？哎，克隆轨迹。就是说T细胞的演化过程中，哪些序列得到了复习，哪些序列哎慢慢淘汰掉了，这也是在识别这个有效维逆这序列的一个过程，呃，一个。过程中啊，一个非常有效的一个方法。哎，从这个方向呢去分析的，哎，分析到这个程度呢，基本上就可以了，而对于我们空间VDG来讲，虽然还没有商用化，哎，大家了解了解这个技术啊，将来一定会在一定程度上实现商业化，那么在识别空间特定区域的VDC之后呢，哎，对它区域离特征的一个提取。就是大家所要分析的一个核心点了。

只不过这个呀，可能和离大家还比较遥远，但是如果将来大家和我一样从事这个行业，那就离得不是很远了啊，因为公司一般都有专门的研发人员啊，像这种小的小小的啊，就是小范围的研发啊，一般公司都是能做到的，大范围的可能还需要更多的一个力量。它的小范围都可以做到啊。好了。我们简单的来看一下这个。代码部分啊，今天的课程啊，可能离大家比较远啊，所以科普居多啊，但是呢，这个motive的分析大家是一定要学会的啊，一定要学会了。哎，这个就是我们拿到的这个。实成的这个VDZ序列的一个文件。哎，VD的序列这个文件啊。克隆，哎。BCR, 当然这个是BCR的啊，哎，VDC基因是什么？氨基酸序列哎，核苷酸序列等等等等，这样一个序列全长，包括全程VDC基因啊等等等等，CDR1CDR2等等等等啊。

这个呢，就类似于这个我们从10层拿到那个结果了啊，我们现在要分析其中的核心某体辅实力。哎，分析的时候呢，第一步干嘛。定义啊定义。先把单细胞定义好，定义好之后呢。定义好之后，哎，知道哪些T细胞亚群之后呢干嘛。哎，对它进行样本分组的一个识别。哎，前面提到过。不是说所有的某替服，哎，所有的VD系列都可以起到作用啊，只有那些核心的某替才可以起到作用。那么如何识别这种有效的motif啊，就是有效的序列呢？如何识别我们哪些序列才是我们想要的那个序列呢？

哎，这个时候呢，如果从单细胞转录组的一个情况来看，哎，那就是这些T细胞很明显对疾病，哎，疾病样本或者肿瘤样本发挥了作用。发挥了作用怎么办呢？它肯定会显著负极，某些AVD的序列能够识别它，这个时候呢，这个T细胞很可能啊。就是这个疾病样本独有或者占主导，或者肿瘤样本独有或者占主导的一个现状。啊，当然也不排除那种，哎，就是正常样本中也有那种VD的序列能够识别肿瘤，但是大概率啊，是肿瘤样本中哎，占据主导的，但是这个群啊，一般都非常的小，是一个小的亚区啊。比如说只有几十个几百个这样一个状态，几十个几百个这都算多的啊，还是需要大家大样板分析之后才能才能可能才能找到这个小区。空间就不必多言了，空间的样本大家都看到了，那个样本内部啊，即使能够检测到VD的序列，它的风度和含量都是非常低的。

对吧，那么这些风度含量低的哎，风度含量少的哎，就是我们所要寻找的核心序列了。等大家拿到这个核心序列之后呢，第一步我干完啊。哎，第一步干嘛把那些有效的8个的先挑出来啊。把有效的八卦的先挑出来。哎，挑出来，挑出来之后呢。分析题的核心特征就可以了啊，这里面我给大家简单演示一下，当然这里我没有调啊，我是把这个放进来了。我没有听啊，我把所有的都放进来了，大家要这个。哎，大家要对它进行一个挑选。拿到自己核心的一个序列啊。哎，接下来呢，就是一些简单的特征识别了啊。简单的特征识别。这个软件大家应该都听过啊，很多公司也用这个软件来分析VB这序列就是这个。

哎，这个叫这个这个这个软件。哎，核心的危机的序列啊。哎，接下来呢，就是简单的分析了，这个rise精度是200，哎，200是图像的精度啊。哎呀，随便画个图就可以了啊。嗯。哎，拿到的就是我们这个。VDC的一个motif的图片了啊，这个图片可以直接放在文章里面的啊。哎，就是这样的。首先要拿到这个序列啊，大家要会分析啊，会分析，因为我们如果不挑选样本诶，它分析得到的就是这样一个非常杂乱的一个某if序列，那么真正的某if序列是什么样子的呢？如果大家前面经经过了这个精细的一个定义。选择了细胞之后啊。真正的一个某T序列，大概就是我在讲单细胞VDG的时候的一个序列。

哎，类似于这种的。有没有更明显的，我看一下啊，啊这种的。就是有些地方啊，很稳定。啊，只能是C，只能是A这样一个模式。啊，有的地方呢，相对滑动这个变化性比较高一点，哎，例如这样，他用了这个百分号表示，这才是我们想要的真正的一个核心的一个序列序列信息啊。如果大家前面经过了一个认真的挑选，哎，认真的一个筛选，拿到了肿瘤占主导或者疾病占主导的一个T细胞小群，哎，对它的序列进行分析的时候，一般都是拿到这样的一个类似的一个序列。啊，这个序列呢。当然了，如果大家有条件的话，可以往下再走走，比如说做一点这个小鼠实验，或者说细胞实验，看看它到底是不是能结合固定的抗原。啊，当然这个抗原获得也比较麻烦啊，也比较麻烦。

哎，进一步往下走走，看看它是不是有一个核心的，这个核心的某梯符是不是真正在起作用。第二个呢，就是对它进行，如果真的在起作用，再往下走，比如说对它进行基因工程改造，提高其亲和力。嗯，再往下呢，就是哎TCRT了，如果大家能做到这种程度，就是能做到TCRT疗法的这个时候啊。啊，大家相当牛了啊，相当的厉害了。做这些人都是什么，什么级别呢？啊，我认识2个在做TCT疗法的。一个是协和的博士后，现在在美国哈佛大学做研究员。还有一个是，还有一个也是那个协和协和毕业的，现在已经快五六十了吧，他也是擅长药物设计的，哎，他也在研究这个TCRT疗法的一个内容。他他在他在哪儿呢？他也在美国啊啊，美国确实研发能力比较强啊，也吸引了很多人去，我们国内很多人才都在去啊，呃，任正非老先生说的很对，呃，真正的研发，呃，真正的卡脖士的是在外国的中国人啊，卡的我们，呃卡的这个国内其实很困难啊，很困难，但是也，哎，但是我们国内也在慢慢追赶啊，等到我们什么时候开始重视研发。

哎，像这个华为一样，愿意投大量的金钱去做研发。哎，那个时候我们可能，哎，可能在这个方向才能真正的强大起来吧。啊，当然了，这节课离大家还比较远啊，大家了解了解，知道有VB空间VB这这回事儿，哎，就可以了，如果将来呃，跟了一些大老板，比如说院士，比如说年薪，呃，经费几千万好几亿的这种。呃，对，这个小贷呃，不仅要做研究，还要往临床上方向啊，这个演化演化的可能就需要做一个空间VPC。

不过像我们普通人的研究啊，啊，大多数研究转入组织，哎，这个可能就比离我们比较遥远，也不可能花一些大的代价去做这种空间VDC的一个研发合作项目啊。嗯。啊，现在主要是很多人连单细胞微粒这些还没研究明白啊，所以说对于空间微粒在来讲就更加遥远了啊，更加遥远了，只有一些非常前沿的人在做啊，你像我这个在公司能够接触到这种项目啊，像这样的人都非常的少，非常的少，可能大家看过这种空间VPC的一个文章。啊，但是真正的能能做到空间VDZ的很少，就像上节课讲到的那个空间微生物一样。嗯，原理大家都知道，但是真正的要去做这个事儿的人，哎呀，非常的少啊，非常的少。哎，大家，哎，记住这个图就可以了啊，有空可以把这个文章读一读。哎，他是专门的，哎。啊，应该大家那个题目大家应该都听过啊，一般都是写什么全球啊，全球首篇FFP空间转录组的一个发的文章啊。

他用的FIP空样本做的空间转录组，哎，同时呢，检测了空间VD的序列。这个文章值得大家哎读一读。还有一篇呢，是这个。哎，这个文章哎发的也很高啊，发的也很高，他哎本身开发了这个special v DZ的一个方法，呃，目前呢，这个方法其实都很成熟啊，方法都很成熟，公司绝对可以复现，只不过是没有一个成，呃，就是那个流程化的一个东西不来。哎，导致呢，现在市面上并没有什么好的一个空间，VB的一个分析内容。以及它的一个商业化平台。啊，不过从这个目前发展来看，应该快了，应该快了。等大家将来在研究的时候，或者从事这个行业的时候啊。哎，这个分析呢，大家要知道啊，现在了解了解即可啊，这一篇这节课以科普居多啊。