关于PCR

最近带教分子与细胞II实验课,因为学时限制,更因为“学无止境”,因此鄙人感觉有必要在课外再补充一些知识。比如聚合酶链式反应(PCR)。

PCR技术应用广泛,以我们实验接触到的常规PCR为例,PCR实验所用到的试剂有

cDNA模板

PCR引物

dNTPs

缓冲液(buffer)

水(当然要求是去离子水或是DEPC水又或是无菌水,反正不能是自来水神马的)

从以上组分看,有两部分是无法通过单纯的购买来解决的:cDNA模板PCR引物

1.cDNA模板

cDNA模板需要我们自己提取组织或细胞中的RNA,并逆转录为cDNA模板。一般采用Trizol法进行提取。

Trizol操作说明:https://pan.baidu.com/s/1gfjc59L

有兴趣同学可以下载,注意三、准备工作中提到的RNase酶的影响,和相应采取的DEPC处理,具体实验操作见四、五、六。得到RNA后,应尽快进行逆转录,合成cDNA模板(cDNA模板可以在-20度冰箱中保存1年甚至更久)。

2.PCR引物

PCR引物需要进行设计合成。

对于PCR引物设计这个问题,比较简单又稳妥的办法是找一篇靠谱的相关文献,直接使用作者提供的目的基因的PCR引物。

当然,有时候找不到合适的文献,那么我们就得自己设计引物(高大上的赶脚出来了有木有!!)设计引物的软件很多,这里以引物设计软件primer premier 5为例。

primer5安装包云盘地址(压缩包)

https://pan.baidu.com/s/1bpfMQFt

安装后图标

操作(感谢度娘网友的共享,版权在作者哦)

https://jingyan.baidu.com/album/1876c8529173e5890b1376d7.html?picindex=2

设计好引物后,给引物合成公司打个电话,把你的引物序列发给他们。(比如 擎科、生工等等)then wait。

同时定购其他PCR试剂,静候包括引物在内的各种试剂的送到,万事俱备后,就可以愉快的进行PCR实验了。

云盘提供资源有效期7天,大家抓紧下载。

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  • 原文链接:http://kuaibao.qq.com/s/20171216G00A3Q00?refer=cp_1026

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